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粪便DNA提取试剂盒(柱膜法)

发布时间: :2021-04-26 15:43 浏览次数: :
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详细说明:

 快速操作指南

注意事项 请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项

1.使用前检查 Pre-Wash Buffer及Lysis Buffer F1 是否有沉淀,若有请在55 ˚C加热至完全溶解后使用。

2.Binding Buffer FS 使用前加入35 mL异丙醇(试用装加3.5 mL),并在标签上做标记。

3.Wash Buffer FS1 使用前加入21 mL乙醇(试用装加2.1 mL),并在标签上做标记。

4.Wash Buffer FS2 使用前加入50mL乙醇(试用装加5.0 mL),并在标签上做标记。

5.准备100个2.0 mL离心管(试用装准备10个2.0 mL离心管)。

6.如果没有Fastprep仪器,可使用涡旋震荡仪(推荐搭配相应适配器),以最大速度涡旋10 min来裂解样本。

7.14000 x g是推荐的离心速度,若离心机达不到可采用其最大速度离心。

 

裂解:     

     1    向Lysing Matrix E中加入30-200 mg粪便样本。

           可选步骤:对杂质含量高的粪便样本可增加预洗步骤,向样本中添加1mL Pre-Wash Buffer, 以最大速度涡旋混匀40 s,14,000 x g离心5分钟,弃上清留沉淀。

     2    向粪便样本或者预洗过的沉淀中加入980 µL Lysis Buffer F1,120 µL Lysis Buffer F2和 10 µL RNase A Solution,涡旋混匀10 s。

     3    使用FastPrep样品制备仪,5.0 m/s 研磨40 s,或采用涡旋震荡仪最大速度研磨10 min。

           备注:以上研磨条件适合于大多数样本,但个别样本需要的研磨速度和时间需要尝试后确定。

     4    14,000 x g,离心5 min。

去杂:

     5    小心地吸取上清液(约800 µL)转移至新的2.0 mL离心管(自备)。

     6    向离心管中加入250 µL Inhibitor Removal FS ,颠倒混合10次。

     7    1,4000 x g,离心5 min。

结合:

     8    小心地吸取上清液900 μL,转移至新的2.0 mL离心管(自备)。

     9    向离心管中加入900 µL Binding Buffer FS ,涡旋混匀。

     10   将结合柱Column F1 装入配套的2.0 mL收集管,向Column F1中加入800 µL 上述混合液。1,4000 x g,离心30 s,倒掉收集管中液体,再次安装好收集管。重复一次本步骤。

漂洗:

     11   向Column F1中加入500 µL Wash Buffer FS1,1,4000 x g,离心30 s,倒掉收集管中液体,再次安装好收集管。

     12   向Column F1中加入500 µL Wash Buffer FS2,1,4000 x g,离心30 s,倒掉收集管中液体,再次安装好收集管,重复本步骤一次。

     13   不加任何试剂,1,4000 x g,离心2 min。

干燥:

     14   将丢弃2.0 mL收集管,将Column F1装入配套的1.5 mL收集管。

     15   将Column F1在室温条件干燥5 min。

     16   DES Buffer 提前置于 55 ˚C 预热。

洗脱:

     17   向Column F1柱膜中央加入100 µL 55℃预热的DES Buffer,1,4000 x g,离心1 min。

     18   1.5 mL收集管中液体即为洗脱DNA,可应用于下游实验,长期保存请置于-20˚C , 避免反复冻融。

 

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