EBM-2培养基国内家代理公司---始于2001年毕特博生物
以下是网页的对话内容摘要
请教：
国内哪家公司代理有VEGF的EBM-2培养基。
是毕特博吗。
寒冰 wrote:
请教：
国内哪家公司代理有VEGF的EBM-2培养基。
是毕特博吗。
我查到的也就只有这家
以下是来源网址的具体内容：
http://www.med66.com/html/ziliao/yixue/19/23da6eee3d452c3c3ea8e61068369229.htm
请问用什么培养液好啊
tonywujun wrote:
同志们，这段时间养小鼠骨髓来源的EPC出现奇怪现象，其中一些细胞4天后快速增殖，迅速形成片状集落，细胞可以排列形成线样结构，且可以融合，有些还有分支，形成的结构很像带有分支的血管，奇怪了，我从来没有见过这种细胞，请各位战友帮忙看看这可能是什么细胞。
一张100倍的图
应该是瓶子上的划痕留下的。细胞沿着划痕生长，看看我养的细胞，更漂亮。呵呵，当时觉得不可思议。其实，是个肝癌细胞而已。
（缩略图，点击图片链接看原图）
不过，我做实验，发现好多次，原代EPC培养的时候，确实会出现部分细胞连接成环状，几乎每次原代都可以发现。可以肯定，不是划痕所造成的，下图是比较典型的一张，偷懒，没有用摄像头拍，用数码相机拍的，所以拍摄效果不太好。‘
（缩略图，点击图片链接看原图）
个人同意yulinlong战友的观点。
yulinlong战友的图片又多又漂亮，与他相比真是逊色多了，
匿了。
首先我肯定的是这不是fibronectin划痕造成的结果，培养皿内形成的片状细胞团块很大，目前已经对此细胞进行了lectin和CD31的免疫荧光鉴定，不表达，基本上表明其不是内皮及其前体细胞，具体是什么细胞还不清楚，但从形态上讲，不像成纤维细胞、内皮细胞、平滑肌细胞、骨骼肌细胞、心肌细胞，不管怎样，以前从来没有见过，且比较了所有相关帖子上的细胞，没有见到相类似的细胞，真是郁闷呀，哪位高人提供一下线索呀。
用国产淋巴细胞分离液分离、提取白膜层后老是混有较多的红细胞，其影响单个核细胞的贴壁。本人所在实验室建议使用蒸馏水破除。
请问各位高手，你们是怎么处理这些红细胞的？
另外使用羟乙基淀粉法效果好吗？
小小鸟 wrote:
八戒兄：
你在实验中也能将外周血单核细胞浓度调整到1*10的9次方/L？真是羡慕啊。不过听我师姐说外周血单核细胞不多，要将10 ml的血分离出这么多单核细胞我还是有点诧异。请问八戒兄也是用10ml血分离的吗？
1*10的9次方/L只是个浓度问题，并不是个数量，10ml血分离1*10的9次方/L×
10ml,是不是？
1*10的9次方/L只是个浓度问题，并不是个数量，10ml血分离1*10的9次方/L×
10ml,是不是？
这个我明白，但我从文献上看到：成年循环EPCs数量非常有限（100～500个/ml），照1*10的9次方/L×10ml这样算，10ml外周血有10的7次方EPCs，还是跟文献不符啊
请教：
国内哪家公司代理有VEGF的EBM-2培养基。
是毕特博吗。
寒冰 wrote:
请教：
国内哪家公司代理有VEGF的EBM-2培养基。
是毕特博吗。
我查到的也就只有这家
在学习了playingstone 战友的2篇大作（一篇已经发表：生物医学工程与临床，2005，7，9（4）243～246.恭喜恭喜）之后，受益颇丰：
1.playingstone 战友培养方法比较有新意，综合了目前2种有争论的培养方法。我想问下48h内贴壁细胞和48h后贴壁细胞中内皮祖细胞的纯度比较问题，哪个更纯一些？也就是说哪个内皮祖细胞含量更多些？
2.playingstone 战友采用骨髓来源的培养方法，在用密度为1.071的淋巴细胞分离液（上海华精生物制品厂）进行梯度密度离心分离单核细胞，18℃,1500r/min离心23min后。想问下，实验室采用的是什么离心机，哪个厂家的。因为我们自己也在用这种淋巴细胞分离液，效果很不好，用的是Beck man高效离心机，400g，30min，效果很差，几乎看不到白膜层，连红细胞都没离心下来，试剂是刚买的，未过期。很是郁闷。
3.playingstone 战友在离心后，似乎未经过洗这一步，就直接制成细胞悬液，是不是在骨髓来源的培养方法中是这样的呢，有点疑问？呵呵
谢谢，欢迎讨论！
一般是800G的离心力，既然你的机子是400G 那就把转速适当调高就是，比方现在是1500R/M,先调到2500R/M左右试试。,
小小鸟 wrote:
八戒兄：
你在实验中也能将外周血单核细胞浓度调整到1*10的9次方/L？真是羡慕啊。不过听我师姐说外周血单核细胞不多，要将10 ml的血分离出这么多单核细胞我还是有点诧异。请问八戒兄也是用10ml血分离的吗？
我是10毫升分大约10的7 单个核细胞的
两个问题：
1.UEA-I和DiLDL双染色阳性细胞为正在分化的EPCs的原理是什么？而且我见一篇文献竟然用是否DiLDL染色阳性区别EPC和EC，不解
2.有用多聚赖氨酸代替Fn包板的吗？
请都各位，我准备培养大鼠的EPC，不知大家所用的VEGF和b-FGF是哪家公司的，有小包装吗？
下面是一篇blood上的如何培养EPC的文献，希望对大家有用。文件太大（475kb)，不能上传，所以给出全文摘要。
EPC生长特征.doc (35.0k)
我们买的VEGF是 sigma公司的，2微克包装的，500块钱，bFGF没买，我们用的是M199培养基＋VEGF＋PEX＋20％FBS养的兔的EPC，效果还行。
以前用的是EGM培养基，后来有一阵子EGM国内缺货，就改用了上述配方。
两种相比较，EGM培养基培养细胞的状态稳定一些，而且细胞生长较均匀，现在用的这这种培养基养的EPC原代的时候全部成簇状生长，也就是说一个培养瓶里长几大团细胞，没有细胞簇的地方几乎都是空的。长了6天以后有细胞的地方非常密，我们就消化，把细胞吹下来后还是放在原瓶里长，细胞就长得比较均匀了，生长速度也还可以。
以前用EGM时我们用的是5％血清浓度，现在用M199是20％血清浓度，但是感觉还是没有EGM时长得快。
请教大家：
加VEGF诱导骨髓细胞应在什么时候加？大概传几代啊？
寒冰 wrote:
请都各位，我准备培养大鼠的EPC，不知大家所用的VEGF和b-FGF是哪家公司的，有小包装吗？
下面是一篇blood上的如何培养EPC的文献，希望对大家有用。文件太大（475kb)，不能上传，所以给出全文摘要。
帮你把全文上传下
分成2部分，都下载后，放在同一个文件下，然后解压part1就可以了。
2577.part1.rar (244.14k)
22222222222222222222222222222
2577.part2.rar (211.6k)
请问cici_wl 师兄：
你是培养大鼠EPC吗，EGM是哪家公司的，培养板包被了吗，是自己包的吗？
谢谢。
playingstone前辈，请教您一下：
骨髓源的内皮祖细胞是本身就存在于骨髓的，而不是由MSCs分化而来的吗？如果是，它的前身是什么？
MSCs能不能分化为内皮祖细胞，还是只能分化为成熟内皮细胞？
我见到的文献好像不管是骨髓、外周血、脐血的内皮祖细胞，都是直接就用内皮细胞诱导培养基培养。就您所知，有没有先扩增MSCs，再将其诱导为EPCs的？
请问各位:你们消化EPC时候,觉得好消化吗?含EDTA的胰酶大概要作用多久啊?
我消化了15分钟(37度),吹打了几次才勉强下来!!
请问：
用DMEM低糖 和 高糖 的培养基对细胞的影响是什么呢？为什么MSC要用低糖的呢？
恳请指教。谢谢！
harry158:
你好，我也打不开下面这篇综述，能否发一份到邮箱(newbyte163@163.com)
综述 <Unresolved questions, changing definitions, and novel paradigms for defining endothelial progenitor cells >
(blood ,106,1525-1531).
我已经分离了数次脐血里的EPC,大家说的这些我好象似曾见过,可鉴定时总是CD133(-)和CD34(-),但每次贴负在FIBRONECTIN上细胞也不少,我真不知道如果不是EPC会是什么,作了快3个月了,一直这样,都快崩溃了,大家帮我出出主意吧,多谢.
meini:
这片文献上有很漂亮的EPC集落 "Granulocyte Colony-Stimulating Factor Mobilizes Functional Endothelial Progenitor Cells in Patients With Coronary Artery Disease"(Arterioscler Thromb Vasc Biol. 2005;25:296-301.)
是pdf 文件,不知道怎么上传,如果有需要请告诉我邮箱.
我的邮箱是newbyte163@163.com,非常感谢.
求合购：
我现已问好小鼠CD 133 和FLK－1 上流式检测抗体，最小包装分别为25微克和50微克。（为Biosource公司产品）（都可以上100管以上）
由于本人只能用一半的量。价钱比较昂贵。想找位战友一起分享。我在武汉。有意者请与我联系。qq 358228927。 手机：13476210795
急！！急！！急！！
不好意思，才回贴。前一段时间出去开会。
现在EPC培养有些进展，也拍了图片，但我的图片都比较大，不能上传，如你感兴趣我可以发给你。从形态、FCM还是IHC均是EPC。
请问羟乙基淀粉沉淀红细胞怎么做？
不好意思，才回贴。前一段时间出去开会。
现在EPC培养有些进展，也拍了图片，但我的图片都比较大，不能上传，如你感兴趣我可以发给你。从形态、FCM还是IHC均是EPC。
请问羟乙基淀粉沉淀红细胞怎么做？
楼上的PDF文件均打不开，各位都能否MAIL给我。再次感激不禁。我有的东西，不会让各位失望的。多多交流。xiexie
my mail： dryudecai@hotmail.com
强烈建议我们开个网络会议！
方式： Hotmail MSN
时间待定：大家商量
我想一起聊天，可能效果更好
为表诚意，我先贴有关EPC的reriew。
多指教
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