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细胞养着养着就要放长假了，怎么办？ 细胞传代多了，目前用不了这么多，又不能扔，怎么办？ 那么，很多时候，我们需要把细胞冷冻起来，以便于长期保存，以备不时之需。而复苏，就是再次需要细胞的时候，把冷冻的细胞苏醒过来，恢复活力。
冻存细胞一般常用胎牛血清（FBS)和二甲基亚砜（DMSO）。血清是维持细胞生存环境；DMSO是冷冻保护剂，使细胞免受低温冰晶形成、及渗透压改变而导致的物理损伤； 细胞培养书上基本上建议的是两种：70%培养基 + 10%DMSO+ 20%胎牛血清或者10%DMSO+ 90%胎牛血清 。 但经过有些实验室经过对比发现："10%的DMSO，90%的血清"复苏效果相对比"70%培养基 + 10%DMSO+ 20%血清"好。 MP Biomedicals二甲基亚砜（DMSO）可用于细胞、组织和器官的冷冻保护剂，保护细胞免受冰晶引起的机械性损伤；可用于原代、传代培养的细胞，重组细胞，杂交瘤细胞，胚胎干细胞、造血干细胞的冻存。（货号：0219605590，规格：500mL）
那么冻存和复苏细胞需要注意什么呢？且往下看！
一 细胞本身状态 一般情况下细胞的复苏还与原代细胞的活性有关，如果要冻存的细胞悬液本身活性不高的话，后面复苏的存活率也不高。
二 慢冻快融 一般情况下，细胞冻存时要遵循“慢冻快融”的原则。标准的降温速度是1-2℃/min ，当温度到达-25℃，降温速度可加快至5-10℃/min，到-80℃可直接入液氮。有些实验室是梯度冻存：4度，-20，-80，液氮，依次冻存。而复苏速度越快越好。从液氮罐里取出来之后，迅速放在37°C水浴中，尽快融化。
三 安全第一 凡是和液氮接触的操作，注意戴保护眼镜和手套。注意：复苏的时候，在水浴中摇摇动的时候会有爆炸的可能性。另外， DMSO是有毒致癌的。接触的时候一务必要带好手套。
四 DMSO是否要去除 上面提到了DMSO是一种有毒致癌物质。那么，解冻之后，应不应该去除冻存液中的DMSO呢？答案是no。除了极少数特别注明的对DMSO敏感的细胞外，99%的细胞都不需要去除DMSO。后面细胞培养中频繁换液会慢慢去除掉DMSO。
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