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干货!细胞冻存和复苏常见问题

作者:bitebo 来源:本站 发布时间: 2017-08-11 17:35  浏览次数:
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细胞养着养着就要放长假了,怎么办?

细胞传代多了,目前用不了这么多,又不能扔,怎么办?

那么,很多时候,我们需要把细胞冷冻起来,以便于长期保存,以备不时之需。而复苏,就是再次需要细胞的时候,把冷冻的细胞苏醒过来,恢复活力。

 

冻存细胞一般常用胎牛血清(FBS)和二甲基亚砜(DMSO)。血清是维持细胞生存环境;DMSO是冷冻保护剂,使细胞免受低温冰晶形成、及渗透压改变而导致的物理损伤;

细胞培养书上基本上建议的是两种:70%培养基 + 10%DMSO+ 20%胎牛血清或者10%DMSO+ 90%胎牛血清 。

但经过有些实验室经过对比发现:"10%的DMSO,90%的血清"复苏效果相对比"70%培养基 + 10%DMSO+ 20%血清"好。

MP Biomedicals二甲基亚砜(DMSO)可用于细胞、组织和器官的冷冻保护剂,保护细胞免受冰晶引起的机械性损伤;可用于原代、传代培养的细胞,重组细胞,杂交瘤细胞,胚胎干细胞、造血干细胞的冻存。(货号:0219605590,规格:500mL

 

 

那么冻存和复苏细胞需要注意什么呢?且往下看!

 

 

 

一 细胞本身状态

一般情况下细胞的复苏还与原代细胞的活性有关,如果要冻存的细胞悬液本身活性不高的话,后面复苏的存活率也不高。

 

 

 

二 慢冻快融

一般情况下,细胞冻存时要遵循“慢冻快融”的原则。标准的降温速度是1-2/min ,当温度到达-25℃,降温速度可加快至5-10/min,到-80℃可直接入液氮。有些实验室是梯度冻存:4度,-20-80,液氮,依次冻存。而复苏速度越快越好。从液氮罐里取出来之后,迅速放在37°C水浴中,尽快融化。

 

 

 

三 安全第一

凡是和液氮接触的操作,注意戴保护眼镜和手套。注意:复苏的时候,在水浴中摇摇动的时候会有爆炸的可能性。另外, DMSO是有毒致癌的。接触的时候一务必要带好手套。

 

 

 

四 DMSO是否要去除

上面提到了DMSO是一种有毒致癌物质。那么,解冻之后,应不应该去除冻存液中的DMSO呢?答案是no。除了极少数特别注明的对DMSO敏感的细胞外,99%的细胞都不需要去除DMSO。后面细胞培养中频繁换液会慢慢去除掉DMSO

 

 

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