摘要　采用鲎试剂灵敏度复核试验、干扰试验和对比试验。结果表明将乳酸左氧氟沙星注射液稀释4倍，可用灵敏度为0.125 EU．ml－1的鲎试剂作细菌内毒素检查，与家兔热原检查法结果一致。
关键词　热原，细菌内毒素检查法

　　细菌内毒素检查法与热原检查法相比，成本低、快速简便、灵敏度高。为探讨采用细菌内毒素检查法检测乳酸左氧氟沙星注射液热原的可行性，我们进行了鲎试剂灵敏度复核试验、干扰试验和对比试验。结果表明细菌内毒素检查可替代家兔热原检查法检测乳酸左氧氟沙星注射液热原。报告如下。

1　实验材料

　　鲎试剂（批号990402，标示灵敏度0.125 EU．ml－1，湛江海洋生物制品厂）；细菌内毒素国家标准品（批号981，规格9000 EU．支－1，中国药品生物制品检定所）；鲎试剂溶解水（批号990430，规格2ml．支－1，湛江海洋生物制品厂）；乳酸左氧氟沙星注射液（批号981202、981206、981226，规格100 ml∶0.2 g，山东洁晶集团日照海洋制药厂）；家兔（新西兰兔，青岛市实验动物动物实验中心提供）。

2　实验方法与结果

2.1　鲎试剂灵敏度复核［1］　将细菌内毒素国家标准品用鲎试剂溶解水溶解，在漩涡混旋器上混合15 min，然后制备成0.25、0.125、0.0625、0.0312 EU．ml－1的溶液，进行灵敏度复核试验，结果（见表1）。

表1　鲎试剂灵敏度复核

细菌内毒素溶液浓度 0.25 0.125 0.0625 0.0312 阴性对照
（EU．ml－1） ＋ ＋ － － －
　 ＋ ＋ － － －
　 ＋ ＋ － － －
　 ＋ ＋ － － －

　　本批鲎试剂标示灵敏度λ为0.125EU．ml－1，批号990402
　　本研究所用鲎试剂标示灵敏度λ为0.125 EU．ml－1，测得灵敏度λc为0.125 EU．ml－1，λc在标示灵 敏度λ的0.5～2.0倍之间，可以用于细菌内毒素检查。
2.2　干扰试验［2］
2.2.1　内毒素理论限值确定　采用公式L≤K．M－1计算出乳酸左氧氟沙星注射液内毒素理论限值。其中K为家兔和人的致热阈（5EU．kg－1）［3］，M为家兔静脉注射剂量（10 ml．kg－1）［4］。计算得本品内毒素理论限值为0.5 EU．ml－1。
2.2.2　干扰试验　按公式MVD＝CL／λ计算出乳酸左氧氟沙星注射液最大有效稀释倍数为4倍。取热原合格的乳酸左氧氟沙星注射液（批号9811202），用鲎试剂溶解水分别按1∶2、1∶4稀释，再分别用来溶解细菌内毒素国家标准品，并稀释成系列浓度的内毒素溶液。与用水配制的相应浓度的内毒素溶液同时与同一批号的鲎试剂进行比较，若两者反应终点均在0.5～2.0 λ范围内，且λs／λT为0.5～2.0，则认为对细菌内毒素检查法无干扰作用。反之，则有干扰作用。λs：用水配制的内毒素溶液测出的鲎试剂灵敏度，λT：用水配制的内毒素溶液测出的鲎试剂灵敏度。结果（见表2）。
表2　干扰试验结果

鲎试剂批号 供试品批号 稀释倍数 λc/EU．ml－1 λs／λT
990402 981202 1→2 ＞0.25 ＜0.5
　 　 1→4 0.125 1
　 981206 1→2 ＞0.25 ＜0.5
　 　 1→4 0.125 1
　 981226 1→2 ＞0.25 ＜0.5
　 　 1→4 0.125 1

　　本批鲎试剂标示灵敏度λ为0.125 EU．ml－1，供试品为山东省洁晶集团日照海洋制药厂生产。
　　结果表明乳酸左氧氟沙星注射液经1∶4稀释后对细菌内毒素检查法无干扰作用。另取2个批号的乳酸左氧氟沙星注射液重复试验，结果相同。
2.2.3　细菌内毒素检查法与家兔法对比试验　根据上述干扰试验结果和计算所得乳酸左氧氟沙星注射液的内毒素理论限值，我们对10批乳酸左氧氟沙星注射液进行了细菌内毒素检查法和家兔热原法的对比试验。将乳酸左氧氟沙星注射液稀释4倍，采用灵敏度为0.125 EU．ml－1的鲎试剂进行检测，与供试品阳性对照同时检测，结果细菌内毒素检查法全部阴性，家兔法也全部合格，两法一致。
3　小结与讨论

　　鲎试剂灵敏度实验表明试验所用鲎试剂符合规定要求。干扰试验表明乳酸左氧氟沙星注射液稀释4倍后对细菌内毒素检查法无干扰作用。细菌内毒素检查法和家兔法结果一致。表明乳酸左氧氟沙星注射液用细菌内毒素检查法检查热原是可行的。

杨晓峰（山东省青岛市药品检验所　青岛266071）
李升刚（山东省青岛市药品检验所　青岛266071）
慕红丹（山东省青岛市药品检验所　青岛266071）

参考文献

［1］国家药典委员会编：中华人民共和国药典.1995年版；1998增补本，143
［2］国家药典委员会编：中华人民共和国药典.1995年版；1998增补本，143～144
［3］夏振民：药品细菌内毒素检查的限值　药物分析杂志　1995；15（3）∶54
［4］中华人民共和国国家药品监督管理局标准WS—182（X—159）—97

本文来自: 医学论文(yxlw.org) 详细出处参考：http://www.yxlw.org/html/lunwen/yaoxue/20100124/26763.html

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