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elisa检测标本处理

作者:admin 来源:本站 发布时间: 2010-12-21 22:10  浏览次数:
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• 注意事项:

收集标本前必须清楚要检测的成份是否足够稳定。对收集后当天进行检测的标本,储存在 4 ℃备用,如有特殊原因需要周期收集标本,将标本及时分装后放在 -20 ℃或-70 ℃ 条件下保存。避免反复冻融。标本2 -8 ℃ 可保存48 小时, -20℃ 可保存1 个月。 -70度可保存 6个月。部分激素类标本需添加抑肽酶。

• 液体类标本:

标本必须为液体,不含沉淀。包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清、组织匀浆等。 1ml 的 全血可得到 0.5ml 的血清或血浆。每个标本量收集体积= 100ul ×检测种类。取材前须向销售人员索要说明书。

• 血清:

室温血液自然凝固 10-20 分钟后,离心 20 分钟左右( 2000-3000 转 /分)。收集上清。如有沉淀形成,应再次离心。

◇血浆:

应根据试剂盒的要求选择 EDTA 、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂,加入 10 %( v/v)抗凝剂 (0.1M 柠檬酸钠或 1%heparin 或 2.0%EDTA.Na2) 混合 10-20分钟后,离心 20 分钟左右( 2000-3000 转 /分)。仔细收集上清。如有沉淀形 成,应再次离心。

◇尿液、胸腹水、脑脊液:

用无菌管收集。离心 20 分钟左右( 2000-3000 转 /分)。仔细收集上清。如有沉淀形成,应再次离心。

◇细胞培养上清:

检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心 20 分钟左右( 2000-3000 转 /分)。仔细收集上清。检测细胞内的 成份时,用 PBS ( PH7.2-7.4 )稀释细胞悬液,细胞浓度达到 100 万 /ml左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心 20 分钟左右( 2000-3000 转 /分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。

◇组织标本:

切割标本后,称取重量。加入一定量的 PBS ,缓冲液中可加入 1 μg/L 蛋白酶抑制剂或 50U/ml 的 Aprotinin ( 抑肽酶)。用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心 20 分钟左右( 2000-3000 转 /分)。仔细收集上清置于 -20 度或 - 70度保存,如有必要,可以将样品浓缩干燥。分装后一份待检测,其余冷冻备用。

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