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用ELISA法检测乙肝表面抗原产生假阳性的处理-ELISA,乙肝表面抗原

作者:admin 来源:临床实验室文章来自临床 发布时间: 2011-01-05 09:05  浏览次数:
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笔者在使用科华公司ELISA HBsAg试剂进行血标本检测时经常发现有多数孔出现阳性、弱阳性的情况,我院规定阳性或弱阳性(OD值≥0.060)或(0.105≤OD值≤0.500)都要重新检测,第2天重新检测后阳性率降低。笔者经过仔细的分析、研究和多次的试验发现产生假阳性的原因,并得到了解决,使结果准确无误,全年获得省内质控优秀奖。

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  1  材料与方法 clin-lab.com

  1.1  材料  体检病人标本。试剂:科华ELISA HBsAg试剂,批号20050929;仪器:芬兰产(thermo labsy stems)酶标仪、加样器。 临床实验室

  1.2  方法  标本用北京产LDZ5—2离心机离心。离心结束后,加样、酶免分析仪中,按照HBsAg试剂说明书的要求,进行HBsAg的检测。离心程序有3个:(1)转速1800rpm,时间5min;(2)转速3500rpm,时间10min;(3)转速3500rpm,时间15min。

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  2  结果 clin-lab.com

  标本检测结果见表1。 临床实验室

 表1  标本检测结果(略) 临床实验室

 3  讨论 临床实验室

    经过鉴定和校准的加样器和酶免分析仪都处于正常状态,试验严格按照HBsAg试剂说明书的要求进行,试剂的空白和阴、阳性对照以及室内质控孔OD值都很正常,只有血液标本孔OD值的情况异常,原因在标本的离心和血液的放置时间上。留取检验标本之前,先用金标试剂的检测,检测的结果全为阴性,在HBsAg的ELISA检测中,标本的阳性率不应该很高。笔者通过增加标本的离心时间和提高离心速度解决了影响试验的关键问题。当标本在1800rpm离心5min后检测,每板88份标本中有5~10份出现阳性结果;同一批标本3500rpm离心10min后检测,每板88份标本中有0~3份阳性。另一批标本在3500rpm离心15min后检测,每板88份标本中也只有0~3份阳性。试验结论,把标本彻底离心分离不溶血,就可得到准确的实验结果。这说明,标本的离心处理好坏直接影响实验结果的准确性。

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为了避免ELISA试剂“检测时假阳性的出现”,为了降低检测的假阳性率,取得准确的结果,笔者认为可采取下列措施:

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(1)使用抗凝血标本。

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(2)标本放置10h后再检测较好,让血凝块更好地收缩,让标本中的非特异性活性物质部分或全部失活,降低非特异性反应所致的假阳性率但需要时间较长。

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(3)离心标本检测之前,要加大离心速度(3500rpm),增加离心时间,增加离心时间15min使红细胞和纤维蛋白完全沉淀、离心完全。 clin-lab.com

(4)从事免疫检查的实验室工作人员,必须熟悉有关标本收集和处理的基本知识,并严格执行。 临床实验室

(5)标记酶的选择标准应包括:活性高、贮存和试验中稳定较高的特异性、可溶性、标记不丧失活性、无抑制物检测的方法敏感快捷。 临床实验室

(6)严格按照说明书操作进行。 clin-lab.com

(7)用加样器加血清或血浆时不得加入红细胞和纤维蛋白,这物质影响结果。 clin-lab.com

(8)溶血标本不能检验,应重新抽血。 clin-lab.com

(9)冬天抽血后最好放置温水浴中2h血凝块收缩后再行离心检测。 临床实验室

(10)加终止液时避免产生气泡,保证酶标板清洁。

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(11)手工操作中加样板前后标本间隔时间不宜过长,操作应熟练或分批操作。 临床实验室


 作者单位: 041000 山西临汾,临汾第四人民医院检验科

文章来自临床实验室仪器信息网(www.Clin-Lab.Com) - 详文链接:http://www.clin-lab.com/html/linjian/mianyi/201004/25-19300.html 
 

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