【摘要】乙型肝炎病毒是当今流行最广泛,危害最严重的病毒性肝炎之一，相当一部分乙肝携带者可以发展成慢性肝炎,需要接受病毒治疗。目前多以其血清感染标志物乙肝两对半及HBV-DNA定量，作为临床分析和判断乙肝患者病情、疗效及预后的主要依据,但由于两对半的组合模式复杂多样,导致部分患者的HBV感染复制状况难以判断,而HBV-DNA是乙肝病毒感染和复制的特异性指标,是表明其具有传染性的最有力的证据。但是受到实验室要求较高的严格限制,尚无法普及检测,为了进一步探讨乙肝两对半与HBV-DNA定量结果之间的关系。本文对ELISA法检测乙肝两对半与荧光定量PCR检测HBV-DNA的比较进行分析比较。
【关键词】ELISA法检测；荧光定量PCR检测；HBV-DNA
The ELISA law examination hepatitis B two fifty-fifty examine with fluorescence quota PCR to measure HBV-DNA the comparison
QINMeiWENBo
【Abstract】The hepatitis B virus is popular now widely, harms one of most serious toxic hepatitis, quite a part of hepatitis B carrier may develop the chronic hepatitis, needs to accept the viral treatment. At present are many by his/her the blood serum infection designated object hepatitis B two fifty-fifty and the HBV-DNA quota, takes the clinical analysis and the judgment hepatitis B patient condition, the curative effect and the prognosis main basis, but because two combination patterns fifty-fifty complex diverse, causes the partial patient's HBV infection duplication condition to judge with difficulty, but HBV-DNA is the hepatitis B virus infection and the duplication specificity target, is indicated that it has the infectious most strong evidence. But receives the laboratory request high strict limit, was still unable to popularize the examination, to further discuss the hepatitis B two fifty-fifty with the HBV-DNA quota result between relations.
【Key words】ELISA method examination; Fluorescence quota PCR examination; HBV-DNA
乙型肝炎病毒是当今流行最广泛,危害最严重的病毒性肝炎之一[1]，我国是乙型肝炎高发区,年感染为7%,累计HBV感染人群为60%以上[2],受感染的个体中约10%可导致慢性携带者状态,相当一部分乙肝携带者可以发展成慢性肝炎,需要接受病毒治疗。目前多以其血清感染标志物乙肝两对半及HBV-DNA定量，作为临床分析和判断乙肝患者病情、疗效及预后的主要依据,但由于两对半的组合模式复杂多样,导致部分患者的HBV感染复制状况难以判断,而HBV-DNA是乙肝病毒感染和复制的特异性指标,是表明其具有传染性的最有力的证据[3]。但是受到实验室要求较高的严格限制,尚无法普及检测,为了进一步探讨乙肝两对半与HBV-DNA定量结果之间的关系,现将分析结果报告如下:
1标本来源
2007年10月1日~2008年3月31日期间，我院住院及门诊乙肝病例148例, 其中男性82例,女性66例,年龄16~72岁之间,平均年龄为33.5岁。
2方法
2.1ELISA法试剂由上海科华实业有限公司提供,使用BIO-RAD Model 680酶标仪比色判断结果，结果判定：样品OD值s/c.o.≥1为阳性，样品OD值s/c.o.＜1为阴性。
2.2FQ-PCR法： HBV-DNA试剂盒由中山大学达安基因股份有限公司提供, 操作严格按说明书进行，扩增仪为Roche LightCycler?原装进口全自动实时荧光定量PCR扩增仪，反应结束后，由专用自动分析软件计算HBV-DNA定量结果，结果以IU/ml表示。结果判断：≥1000IU/ml为阳性，＜1000IU/ml为阴性。
3结果与讨论
4讨论
多年来，临床对乙肝的诊断多依靠乙肝两对半结果，酶联免疫吸附法（ELISA）则是主要的检测手段，但两对半结果反映的是机体感染HBV后的免疫状态，提供的是HBV感染的间接依据，加之抗原、抗体蛋白的变性、窗口期的存在等等因素，因此已不是最为可靠的检测方法。而荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）采用实时荧光检测技术，通过实时捕捉反应体系在扩增过程中荧光信号的变化，利用荧光信号达到某一阈值时的循环次数与起始模板DNA量的对数值之间存在严格的线性关系，即可对起始模板进行定量，该法检测的是乙肝病毒本身，因此是反映HBV复制最直接、最可靠的证据。
本次检测结果显示，在乙肝两对半几种常见模式中，“大三阳”患者PCR检测符合率极高,达到94.25%,“小三阳”符合率达到70.45%,一般情况下HBeAb(+)表明HBV复制处于较低水平并可能和宿主DNA发生整合，导致含量较低，通过PCR法证实患者仍有较低水平病毒复制，所以“小三阳”结果不能完全反映病毒在体内的复制情况,但实际上患者的病毒基因仍然在进行复制,像这样的病人不可以掉以轻心；上述有1例两对半全阴但PCR检出为阳性,由于PCR灵敏度较高，能检测出体内低水平的HBV感染,其复制表达的HBsAg量在免疫学方法检测的极限之下,加之S基因突变造成HBV不再表达HbsAg，是一种变异体，而常用的免疫学方法所有的抗HBs不能与变异的HBsAg结合导致HBsAg(——)的HBV感染,HBV-DNA可为阳性.只用两对半阴性结果是无法准确判断是否存在HBV感染,但是FQ-PCR检测能弥补上述不足,希望引起临床的重视。PCR技术近年来在临床的应用取得较快的发展,对乙肝的治疗、疗效的评价有着重要的指导作用，对于体内免疫力低下或使用免疫抑制剂体内无抗体产生者,PCR也可以作出明确诊断,对无偿献血、生物制品及相关从业人员查体是否具有传染性等方面提供了一个可靠、特异、灵敏的检测方法。因此,综上所述, HBV-DNA是判断HBV感染最为直接,最为可靠的标志性指标。
参考文献
[1]叶维洪钟振义肝炎学大典天津天津科学技术出版社1996
[2]经卓然临床微生物和微生物检验 M北京 人民卫生出版社2003
[3]严根宝蒲瑞连顾建人等聚合酶链反应直接检测HBV-DNA方法改进中华传染病杂志1992
作者单位：550000贵州省贵阳市第一人民医院
本文来源于三九免费医学论文期刊网:http://www.39papers.com/ 全文阅读链接：http://www.39papers.com/integrated-medicine/health-medicine/3892_2.html |
