1. 直接适应——细胞从添加血清的培养基转换到无血清培养基（SFM）中。 一些类型细胞可直接从包含血清的培养基适应无血清培养基。对于直接适应，接种细胞密度应该:2.5×105~3.5×105细胞/ml。当细胞密度达到1×106~3×106细胞/ml时，传代培养细胞。当细胞密度在培养4到7天后达到2×106~4×106细胞/ml时，细胞完全适应了无血清培养基。每隔3~5天，当细胞密度达到1×106~3×106细胞/ml，细胞活率在90％时，贮备的适应了无血清培养基的细胞培养物应该再次传代培养。 2. 连续适应——分好几步把细胞从添加血清的培养基转换到无血清培养基（SFM）中，与直接适应相比较，连续适应趋向对于细胞更加温和一些。 （1） 以2倍正常接种密度接种生长活跃的细胞培养物到75％有血清培养基：25％SFM 混合培养基中，传代培养。 （2） 当细胞密度>5×105细胞/ml时，以2×105到3×105细胞/ml细胞密度，在有血清培养基：SFM为50∶50的混合培养基中传代培养。 （3） 以2×106到3×106细胞/ml细胞密度，25％有血清培养基和75％ SFM中传代培养。 （4） 当细胞密度达到1×106到3×106细胞/ml（接种后4到6天），在100％SFM培养基中传代培养。 （5） 每隔3到5天，当细胞密度达到1×106到3×106细胞/ml，细胞活率在90％时，贮备的适应了无血清培养基的细胞培养物应该再次传代培养。 建议备份前一次混合培养的培养物，直到每一次细胞适应了新的混合培养基。每一次减少血清前，可能需要在SFM/有血清混合培养基中进行几次传代。 在适应过程中，最好不要让细胞生长过度。这将增加选择亚群的可能性。需要注意，与有血清培养基相比，大部分SFM包含非常少的蛋白质，因而更易于受外界因素的影响。 细胞培养适应替代血清：许多细胞利用连续适应方法能很好的适应，用包含FBS的的培养基和包含有替代血清的培养基1∶1（v∶v）的混合培养基培养细胞。通过下列的混合培养基的方式，连续几代减少当前培养基的量：1∶2，1∶4，1∶16和100％替代培养基。每次适应改变血清比例时，传代细胞2到3 次。 培养可以直接从FBS转换到替代血清。一开始就使用相同于FBS的浓度的替代物或血清，生长的延迟可能会发生，4允许进行2到3次的传代，使生长率恢复到以前的水平。 特别需要强调的是：配制无血清培养液必须使用高质量的水，如石英玻璃蒸馏器经三次蒸馏或超纯水净化装置制备的水。因为无血清培养基缺乏了血清中天然成分中和毒素、保护细胞的大分子，既便水中的有毒物质含量甚微，也可能对细胞产生致死性损害。这是无血清培养能否成功的关键因素之一。 无血清培养基的优点 1. 可避免血清批次间的质量变动，提高细胞培养和实验结果的重复性。 2. 避免血清对细胞的毒性作用和血清源性污染。 3. 避免血清组分对实验研究的影响。 4. 有利于体外培养细胞的分化。 5. 可提高产品的表达水平并使细胞产品易于纯化。 缺点： 1. 细胞在无血清培养基中易受某些机械因素和化学因素的影响，培养基的保存和应用不如传统的合成培养基方便。 2. 成本较高。 3. 针对性很强，一种无血清培养基仅适合某一类细胞的培养。 无血清培养基一些配方 1. 神经细胞，干细胞，PC12细胞 成份 终浓度 葡萄糖－－0.6％ 谷氨酰胺－2mM NaHCO3－－3mM Hepes －－5mM 胰岛素－－2.5μg/ml 转铁蛋白 －100ng/ml 孕 酮 －－20nM 丁二胺－－60μM 硒酸钠－－30nM 青霉素－－50mg/ml 链霉素－－50mg/ml 最后用DF12添加到100ml即可 2. 各类小鼠胚胎癌细胞系培养基 DMEM/F12 1:1混合成1000ml NaHCO3 2.4g HEPES「1.5M」 10.0ul 硒酸（5*10-6M」 10.0ug 纤粘连蛋白 1ug/cm2「37度作用15－30分钟） 胰岛素 1000.0ug 转铁蛋白 5000.0ug 3. NIH3T3小鼠成纤维细胞培养基 DMEM/F12 1:1混合成1000ml HEPES 15mM 大豆胰酶抑制剂 0.1％ 胰岛素 10.0ug/ml 转铁蛋白 25.0ug/ml 纤粘连蛋白 5.0ug/ml 4. 杂交瘤细胞培养基 DMEM/F12 1:1混合成1000ml NaHCO3 1.2g/L HEPES 15mM 胰岛素 5.0ug/ml 氨基乙醇 20.0uM 硒酸 2.5mM 转铁蛋白 35.5ug/ml
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