作者：周晔,张莉 作者单位：上海交通大学医学院附属仁济医院崇明分院,上海 崇明 202150) 来源：医学期刊
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【摘要】
目的：对用ELISA法检测乙肝表面抗原产生“假阳性”进行分析及找出解决的方法。方法：用不同的转速和时间对同一批标本进行离心，再用ELISA法检测乙肝表面抗原。结果：同一批标本通过增加标本的离心时间和提高离心速度使假阳性结果减少。结论：离心是乙肝表面抗原产生“假阳性”主要影响因素。
【关键词】 酶联免疫吸附试验(ELISA)夹心法 乙肝表面抗原 假阳性 离心
Purpose to the Method that Carries on Analysis and Finds Out to Solve withthe ELISA Examination HBsAg Creation “False Positive”
ZHOU Ye,ZHANG Li
(Chongming Branch of Renji Hospital,Shanghai Traffic University,Chongming,Shanghai 202150,China)
Abstract: Objective Purpose to the method that carries on analysis and finds out to solve with the ELISA method examination HBsAg creation“false positive”.Methods By using to turn differently to carry on centrifugence to the same batch of specimen with time soon,and then sing ELISA examination HBsAg. Results By increasing time and rotate speed can make the false male result reduced. Conclusion Centrifugence is the main influence factor which creates “false positive”.
Key words: ELISA;HBsAg;False positive;Centrifugence
乙型肝炎在我国的发病率很高，是当前严重危害人们身体健康的传染病之一。乙型肝炎表面抗原(HBsAg)是乙肝的感染指标之一，因此，HBsAg的检查往往是体检的项目之一，对乙肝的预防和治疗具有重要的意义。检测乙肝表面抗原，常采用酶联免疫吸附试验(ELISA)夹心法以及胶体金免疫层析法(GICA)。ELISA具有操作简单、技术可靠、试剂方便易得等优点，特别是20世纪90年代以来ELISA的灵敏度和特异性都得到了显著的提高，所以尽管检测HBsAg的新技术如PCR、化学发光法、电化学发光法及时间分辨免疫荧光法等不断地被建立和应用，ELISA作为一项成熟的检测技术仍有较大的应用价值。故本科室以ELISA为主检测HBsAg，GICA则作为体检筛选检测。在使用ELISA HBsAg试剂进行血标本检测时经常发现有数孔出现弱阳性的情况，上海市临床检验质控中心规定0.073 5≤OD值≤0.210都要重新检测，第2天重新检测后阳性率降低。经过仔细的分析、研究和多次的试验发现产生假阳性的原因，并找到了解决的方法。
1 材料与方法
1.1 材料
体检人员的标本共180份。
1.2 试剂与仪器
HBsAgELISA试剂盒(上海实业科华公司)；全自动洗板机(美国宝特ELX-50型);全自动酶标测定仪(美国宝特ELX-800型)。
1.3 方法
抽取静脉血，用北京产LDZ5-2离心机离心取血清标本。离心结束后，试验严格按照HBsAg检测的 SOP要求进行检测。离心程序有4个：(1)转速1 000 rpm，时间5 min；(2)转速2 000 rpm，时间5 min；(3)转速3 000 rpm，时间15 min；(4)转速3 000 rpm，时间30 min。
2 结果
180份标本检测结果(见表1)。表1 180份血标本HBsAg检测结果[份(略)]注：与程序#比较，*P<0.05，**P<0.01，#P>0.05。
3 讨论
ELISA检测中受到许多因素的影响, 如检测时间、血细胞[3]、加样量、洗板方式[4]、血清分离等。通过对180份标本检测结果的分析比较，发现试剂的空白和阴、阳性对照以及室内质控孔OD值都很正常，只有血液标本孔OD值的情况异常，原因在于标本的离心和血液的放置时间上。留取检验标本之前，先用金标试剂的检测，检测的结果全为阴性，在HBsAg的ELISA检测中，标本的阳性率不应该很高[3]。笔者通过增加标本的离心时间和提高离心速度解决了影响试验的关键问题。试验结论，把标本彻底离心分离不溶血，就可得到准确的实验结果。这说明，标本的离心处理好坏直接影响实验结果的准确性。血标本影响ELISA法HBsAg检测结果的主要原因有[4]：(1)血清中的补体可与IgG的Fc段结合，可造成假阳性。(2)血浆中纤维蛋白原和酶结合物一起易粘附到ELISA检测板上不易洗掉，可造成假阳性。(3)血清中若有类风湿因子(RF)，RF可与抗体结合，造成假阳性。(4)免疫球蛋白聚合物、免疫复合物易吸附于塑料表面，可造成非特异性吸附，导致假阳性。为了避免ELISA试剂“检测时假阳性的出现”，为了降低检测的假阳性率，取得准确的结果，笔者认为可采取下列措施：(1)试剂盒在使用前平衡至室温。(2)使用抗凝血标本。(3)溶血标本不能检验，应重新抽血[1,2]。(4)冬天抽血后最好放置温水浴中2小时凝块收缩后再行离心检测。(5)离心标本检测之前，要加大离心速度(3 000 rpm)，增加离心时间，增加离心时间15 min使红细胞和纤维蛋白完全沉淀、离心完全。(6)标本放置10 h后再检测较好，让血凝块更好地收缩，让标本中的非特异性活性物质部分或全部失活，降低非特异性反应所致的假阳性率但需要时间较长。通过以上措施，可降低ELISA法HBsAg检测的假阳性率,获取理想的实验结果。
【参考文献】
[1] 黄秋芳,王 微,李 永.ELISA检测HBsAg复检结果的分析[J].检验医学,2004,19(4):603.
[2] 陈传德,冷 霜.ELISA一步法检测HBsAg影响因素分析[J].中国卫生检验杂志,2003,13(3):853.
[3] 施纪文, 徐简华, 温惠萍. ELISA法和胶体金免疫层析法检测乙肝表面抗原的比较[J].现代检验医学杂志,2005,20 (5):48-49.
[4] 邢培清, 刘玉振. 实用输血检验 [M].郑州:郑州大学出版社,2001:95-145.
（收稿日期：2008-06-27）
作者简介：周 晔(1973-)，女，上海人，主管技师。
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