问题：如果试剂的体积很小，我该怎么办？
回答：如果试剂的体积很小，请在使用前将试剂瓶离心，以确保试剂集中于瓶底。
问题：不按指定的方法保存试剂可以吗？
回答：不推荐，否则试剂的质量无法保证。
问题：可以将不同批号或试剂盒内的同一试剂混用吗？
回答：不可以。
问题：在包被板使用前必须洗吗？
回答：不是必须，但推荐使用，因为如果省略此步骤精确度可能会降低。
问题：孵育时间延长或缩短可以吗？
回答：孵育时间必须严格按照说明书操作，才能得到最佳的结果。
问题：实验必须重复一次吗？
回答：不必须，但对于每个样本和标准品建议做复孔。
问题：背景色过高是什么原因？
回答：造成背景色过高主要有以下几点原因：
1）不正确的洗涤
洗涤不充分或省略洗涤步骤中的任何一步均会导致背景色过高。
解决方法：检查洗涤缓冲液的体积并确保完成所有的洗涤步骤；确保洗涤缓冲液的正确稀释和正确使用。
2）底物污染
确保在使用前，底物不被金属离子或氧化剂污染；
在实验时留存一些额外的底物
底物本身不应该有颜色
3）稀释液污染
我们的大多数稀释液均含有蛋白，在首次开瓶时可能会造成污染。在从瓶中取液体时一定要用 “灭菌” 的枪头
4) 底物曝光
底物曝光会使底物变成兰色，因此在加入板内之前要保存在暗处(即试剂瓶内)
5) 偶合物的错误稀释
偶合物浓度过高会造成高背景色，因此要严格按照产品说明书稀释
6) 错误的孵育时间和温度
必须严格按照产品说明书来确定孵育时间和温度
7) 包被板保存不当
如果包被板只用了一部分，一定要正确保存剩余的板条。
问题：测试内CV(变异系数)过高是什么原因？
回答：造成测试内CV(变异系数)过高主要有以下几点原因：
1)在洗涤或吸取移液时，刮擦到板孔内部引起包被的抗体脱落
注意在洗涤包被板或吸移标准品和样品时不要刮擦到板孔内表面。
2)在剥除包被板覆盖物时造成孔与孔间的交叉污染
在每次孵育完成时，一定要小心地剥除包被板覆盖物，以免孔与孔间的交叉污染。
3)样品不均一
确保所测试样品是均一的，在加入包被板前要混匀
4)边缘效应
在孵育时要封好包被板，并尽可能在100 rpm的振荡器上孵育。
5)移液器没有正确校准
6)在实验时，要确保移液器经过正确校准
问题：标准曲线不对是什么原因？
回答：造成标准曲线不主要有以下几点原因：
1)冻干标准品重悬不正确
确保冻干标准品重悬在正确的液体中，并以正确的体积重悬。重悬体积在说明书和试剂瓶的标签上均有表明
2）重悬时间过短
确保足够的时间，以完全溶解冻干标准品
3）浓缩贮存标准品的不正确稀释
浓缩贮存标准品要严格按照产品说明书正确稀释
4）贮存标准品/预稀释液的不正确保存
在说明书已注明贮存标准品和预稀释液的保存条件，一定要严格按照说明书操作。
5）标准品污染
使用无菌枪头，保存方法正确可以防止标准品的污染。
6）标准品稀释时没有正确混匀
在系列稀释标准品时，要保证每步稀释时均正确混匀。
7）检测波长不正确
要保证分光光度剂的检测波长是正确的。
8）使用其它批号的标准品
只能使用同一试剂盒内的标准品，不可以使用其它批号/试剂盒中的标准品。
问题：不显色是什么原因？
回答：造成不显色主要有以下几点原因：
1）测试前未将试剂恢复至室温
在实验开始前要将所有试剂恢复至室温。
2）某些试剂的不正确保存
所有试剂的保存方法在说明书中均有详述，要严格依其操作。
3）HRP偶合试剂的污染
在此试剂用前一定要确保无污染。
4）HRP偶合试剂的不正确稀释
如果HRP偶合试剂浓缩液过度稀释，则显色变弱，要按说明书操作。
5）2组分TMB的不正确混合
按说明书所示比例混合TMB底物，并保证正确混匀
6）省略孵育步骤
说明书中任何一步孵育步骤均不可省略。
7）洗涤后或储存时，板孔干燥
洗涤后，在吸水纸上拍打板条以去除多余的洗涤缓冲液，之后要立即进行后面的操作步骤或倒口在吸水纸上不超过15分钟，以免板孔干燥。
8)在洗涤或吸取移液时，刮擦到板孔内部引起包被的抗体脱落
注意在洗涤包被板或吸移标准品和样品时不要刮擦到板孔内表面。
9）样品不适合此检测
在说明书中会列出每种产品的适用标本范围，超出范围的标本可能不适于此试剂盒或者检测条件需要摸索(如调节稀释度等)
问题：样品或标准品 “溢值” 是什么原因？
回答：造成样品或标准品 “溢值” 主要有以下几点原因：
1)样品/标准品不正确稀释
要严格按照说明书来稀释样品和标准品。
2)偶合试剂不正确稀释
要严格按照说明书来稀释偶合试剂，浓度过高会造成OD的 “溢值” HRP偶合试剂的不正确稀释
3)所用稀释液不对
只能使用相应试剂盒内的稀释液稀释样品和标准品。
4)检测波长不正确
要保证分光光度剂的检测波长是正确的。
5)TMB底物的显色时间过长
请监控显色时间。说明书中所示的显色时间可能因为温度和其它检测条件的不同而稍有变化。
6)样品不适合此检测
在说明书中会列出每种产品的适用标本范围，超出范围的标本可能不适于此试剂盒或者检测条件需要摸索(如调节稀释度等)
7)样品/标准品污染
样品或标准品的污染可能会导致检测结果 “溢值”。
8)孵育时间/温度不正确
要严格按照说明书来确定孵育时间和温度。
9)在孵育时为盖上酶联板覆盖物
在孵育时需盖上酶联板覆盖物，以防止液体蒸发或孵育期间的污染。每个试剂盒内均有足够数量的酶联板覆盖物。 |
