【摘要】 目的 探讨C12蛋白芯片检测在浅表淋巴结转移癌诊断中的意义。 方法 对已知细胞学诊断的浅表淋巴结组织细胞悬液进行C12检测，并同时对入选标本患者进行血C12检测，以病理诊断为最终标准，对以上两种结果进行对照分析。结果 在35例浅表淋巴结转移癌中，细胞学的正确诊断率为57.1%(20/35),淋巴结组织细胞悬液C12检测阳性率为74.3%(26/35),两者相比差异有统计学意义(P <0.05)；肿瘤组肿瘤标记物（TM）指标CA199、CEA、Beta-HCG、f-PSA、PSA、CA125、HGH、CA153在血和淋巴结组织细胞悬液中含量的比值具有统计学意义(P<0.05)。结论 淋巴结组织细胞悬液C12检测对浅表淋巴结转移癌细胞学检查有一定的辅助诊断价值，但对淋巴结转移癌的组织学分类灵敏度不高。

【主题词】  浅表淋巴结转移癌组织; 细胞学检查; 肿瘤标志物; 诊断; 蛋白芯片

 

多肿瘤标志物检测系统是一种集微电子、微机械、化学物理、计算机技术为一体的分析系统，该系统是把多种纯化的探针蛋白高密度排列在固定支持物表面上，样品中的靶蛋白特异性地与探针结合，所以可以对待测蛋白进行定量、定性和功能分析。我国开发的C12蛋白芯片检测系统，是通过分析血清中12种常用肿瘤标志物 (CA199，NSE，CEA，CA242，Fettitin，Beta-HCG，AFP，PSA,，f-PSA，CA125，HGH，CA153)的含量，联合检测以期实现对肿瘤的诊断和检测^[1]。本实验旨在通过对已知细胞学诊断的淋巴结组织的进行C12检测，并与血C12检测结果进行比较，以病理诊断为最终标准，探讨对淋巴结转移癌诊断中的临床应用价值。

1.1 标本来源  取自2007年11月～2009年5月我院肿瘤内科门诊和住院恶性肿瘤患者35例，其中腺癌20例，鳞癌15例，男20例，女15例，年龄29～81(54.9±12.3)岁；取同期淋巴结良性病变15例作对照组，男9例，女6例，年龄21～64(43.4±14.7)岁；两组之间性别、年龄具有可比性(P<0.05)。穿刺标本常规作细胞涂片（将吸取物于载玻片上涂匀，95%乙醇固定10 min， HE染色，显微镜观察有无肿瘤细胞及淋巴细胞浸润），将穿刺针管内残留的吸取物约0.5～1 ml注入装有2 ml生理盐水的10 ml试管中并涡旋混匀，制成组织细胞悬液，置于-20℃保存，标本不够时再行穿刺。

1.2 主要试剂及方法  取受试者清晨空腹静脉血3 ml，静置后分离血清，与淋巴结组织悬液共同采用HD-2001A生物芯片检测仪及检测系统进行测定(湖州数康生物科技有限公司)，严格按使用说明书操作检测。

1.3  细胞学诊断 采用HE染色对细针穿刺图片进行检测。

1.4  统计学处理 用SPSS 13.0统计软件进行有关率的χ2检验。

2.1肿瘤组和良性病变组C12在淋巴结组织细胞悬液及血中阳性率比较 

在35例浅表淋巴结转移癌和15例良性病变患者中，淋巴结组织细胞悬液C12检测的两样本阳性率差异具有统计学意义(P <0.05)，提示淋巴结组织细胞悬液C12检测在浅表淋巴结转移癌中阳性率大于良性病变组；血C12检测的两样本阳性率差异具有统计学意义(P <0.05)，提示血C12检测在浅表淋巴结转移癌中阳性率大于良性病变组。见表1、2。

2.2 肿瘤组和良性病变组C12在血及淋巴结组织细胞悬液中测定结果比较 

肿瘤组CA199、CEA、Beta-HCG、f-PSA、PSA、CA125、HGH、CA153在血和淋巴结组织细胞悬液中含量的比值具有统计学意义(P <0.05)；良性病变组Beta-HCG、 f-PSA、HGH在血和淋巴结组织细胞悬液中含量的比值具有统计学意义(P <0.05)。见表3。

2.3肿瘤组腺癌和鳞癌中的两种C12测定结果比较 

腺癌和鳞癌在血和淋巴结组织悬液中各项C12指标含量比值差异无统计学意义(P >0.05)，提示 TM阳性与组织学分类无直接相关性。见表4。以病理诊断和血C12检测标准，在35例浅表淋巴结转移癌中，浅表淋巴结转移癌细胞学的正确诊断率为57.1%(20/35),淋巴结组织细胞悬液C12检测阳性率为74.3%(26/35),两者相比差异有统计学意义(P <0.05)；肿瘤组淋巴结组织细胞悬液中的TM指标CA199、CEA、Beta-HCG、f-PSA、PSA、CA125、HGH、CA153可以代替该C12蛋白芯片检测系统在浅表淋巴结转移癌诊断中的应用价值。       

 

 

表1 肿瘤组和良性病变组淋巴结组织C12检测结果

淋巴结组织C12	肿瘤组	良性病变组
+	26	5
-	9	10

x2=7.474,P=0.006.

表2 肿瘤组和良性病变组血C12检测结果

血C12	肿瘤组	良性病变组
+	29	7
-	6	8

x2=6.822,P=0.009.

表3 淋巴结组织和血C12测定结果比较分析( ±s)

血中与淋巴结组织细胞悬液中C12含量测定结果比较：*P<0.05,**P <0.01

表4 腺癌和鳞癌的两种C12测定结果比较分析( ±s)

血中与淋巴组织结细胞悬液中C12含量测定结果比较：*P<0.05,**P <0.01

蛋白芯片又名蛋白微阵列，就其应用而言分为蛋白功能芯片和蛋白检测芯片两种类型^[2]。与传统蛋白质研究方法相比，它可以在一次实验中提供相当大的生物信息量，使我们能够相对全面、准确的研究蛋白表达谱，这是传统的蛋白质研究方法无法做到的^[3]。蛋白芯片具有高度灵敏性，可以检测出蛋白样品中微量蛋白的存在，目前检测水平已经达到ng/L级^[4]。因为大多数单一指标的生物学信息已远远不能满足临床诊断和治疗的要求,而且缺乏肿瘤特异性,因某些良性疾病也可出现不同程度的阳性反应,为弥补单一标志物在肿瘤检测特异性和敏感性上的不足,联合检测多肿瘤标志物可得到更有价值的信息, C12系统则一次性检测定12个指标,提高了在肿瘤检测方面的敏感性和特异性^[5]。蛋白芯片技术目前广泛应用于各种癌症的血清学检测和良恶性胸腹水的诊断中，但少见于对肿瘤组织和淋巴结转移癌及鉴别肿瘤类型的分析，以使病理诊断更加精确。刘洁琼等^[6]应用EnvisonTM免疫组化检测方法对108例胆囊腺癌、46例癌旁组织和35例慢性胆囊炎手术切除标本石蜡包埋切片的CA199和CA125进行分析，结果显示胆囊腺癌组织中的CA199和CA125的表达阳性率(49.1%、51.9%)明显高于癌旁组织(26.1%、15.2%)和慢性胆囊炎组织(14.3、5.7%)。如果用免疫组化对肿瘤进行嗜铬粒蛋白(Cg)、神经特异性烯醇化酶(NSE)等检测,阳性则支持该肿瘤为神经内分泌来源的诊断,如肺小细胞癌与淋巴瘤的鉴别^[7]。学者^[8]指出:HCG、α-HCG和β-HCG在食管鳞癌中的阳性表达率分别为56.1%、12.2%和34.1% ,这一结果与HCG、β-HCG在肺鳞癌以及HCG、β-HCG在大肠病变中的阳性表达率基本一致。

细胞学诊断因其使用方便、创伤小、诊断快速，近年来成为临床比较常用的诊断浅表淋巴结疾病的方法，但因取材太少，阳性率不高，临床应用受到一定限制。本研究中将浅表淋巴结转移癌制成组织细胞悬液，按照血C12检测标准对悬液进行C12检测，并对以上两种结果进行统计学分析。结果表明：浅表淋巴结转移癌的细胞学正确诊断率为57.1%(20/35),淋巴结组织细胞悬液C12检测阳性率为74.3%(26/35),两者相比差异有显著性(P <0.05)；淋巴结组织细胞悬液和血中C12检测在浅表淋巴结转移癌中阳性率都大于良性病变组；肿瘤组淋巴结组织细胞悬液中的TM指标CA199、CEA、Beta-HCG、f-PSA、PSA、CA125、HGH、CA153可以代替该C12蛋白芯片检测系统在浅表淋巴结转移癌诊断中的应用价值。本研究表明，淋巴结组织细胞悬液C12检测对浅表淋巴结转移癌细胞学检查有一定的辅助诊断价值，但对淋巴结转移癌的组织学分类灵敏度不高。

 

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