作者：张国庆　王斌　刘振疆　黄艳春　庞作良
 

摘要：目的：探讨3种血清肿瘤标志物甲胎蛋白（AFP）、AFP异质体（AFPL3）和αL岩藻糖苷酶（AFU）联合检测对原发性肝癌（PHC）的互补诊断价值及对肝癌早期诊断的意义。方法：对我院2003年7月~2004年3月收治的49例PHC、50例慢性乙型肝炎和20例正常对照联合检测AFP、AFPL3和AFU水平，采用电化学发光法测定AFP和AFPL3水平，采用速率法测定AFU水平。结果：PHC组与慢性乙型肝炎组、正常对照组血清AFP水平相比差异有统计学意义（P<0.01）；PHC组与慢性乙型肝炎组和正常对照组的AFP均数相比差异有统计学意义；3项标志物单项检测的敏感性分别为65.3%、85.7%、49.0%；联合检测AFP和AFPL3或AFU可使检出率提高至92.1%和83.2%；3项指标联合检测PHC的检出率高达97.0%。结论：联合检测AFP、APFL3和AFU 3项指标可提高HPC尤其是AFP阴性HPC的诊断效率，对HPC的早期诊断有一定的指导意义。

　　关键词:  原发性肝癌；甲胎蛋白；甲胎蛋白异质体；αL岩藻糖苷酶；诊断

　　A study on the combined detection of AFP, AFPL3 and AFU in the diagnosis of primary hepatic cancer

　　ZHANG Guoqing，  WANG Bin，  LIU Zhenjiang，  et al

　　(Department of Surgery, Affiliated Tumor Hospital ,Xinjiang Medical University,
Urumqi  830011, China)

　　Abstract： Objective: To study the complementary value of alpha fetoprotein (AFP), alphafetoprotein variant and αLfucosidase to the diagnosis of primary hepatic cancer.  Methods: Serum AFP, alpha fetoprotein variant and αLfucosidase were measured in 49 cases with primary hepatic cancer and 50 cases with  chronic hepatitis B and 20 normal cases. The three indices were compared and analyzed for the their complementary diagnostic values to primary hepatic cancer. Results: The diagnostic sensitivities of AFP, alphafetoprotein variant and αLfucosidase to primary hepatic cancer were 65.3%、85.7%、49.0% respectively. Simultaneous determination of AFP and alphafetoprotein variant or αLfucosidase could increase the sensitivities to 92.1%  and   83.2% respectively. Furthermore, combines detection of these three indices could make the diagnostic sensitivity as high as 97.0%. Conclusion: The combined assay of serum tumor markers is valuable in the diagnosis of primary hepatic cancer, especially in AFP negative patients.

　　Key words:  primary hepatic cancer；alphafetoprotein；alphafetoprotein variant；αLfucosidase；diagnosis

　　原发性肝癌（PHC）是一种恶性程度高、进展快、预后差、侵袭性强的恶性肿瘤。甲胎蛋白（AFP）是诊断PHC的重要指标，但30%～40%的PHC患者AFP阴性，因此寻找更特异、敏感的肿瘤标志物和诊断方法是研究肝癌的重要课题［1］。大多数单个标志物检测敏感性和特异性都偏低，近年来提倡多种标志物联合检测以提高检测的灵敏度和特异度。本文对我院2003年7月~2004年3月收治的49例PHC、50例慢性乙型肝炎患者和20例正常对照联合检测AFP、AFP异质体（AFPL3）和αL岩藻糖苷酶（AFU）水平，以观察各标志物对PHC的互补诊断价值及早期诊断的意义，尤其是AFP阴性的PHC患者的检出率，为进一步治疗PHC提供依据。

　　1资料与方法

　　1.1临床资料我院2003年7月~2004年3月收治的49例疑为PHC的患者，后经病理诊断证实为PHC患者(PHC组)；50例慢性乙型肝炎患者为第一附属医院传染科患者（慢性乙型肝炎组）；20例本院健康体检者作为正常对照组。3组的年龄、性别等一般资料经检验具有均衡性。

　　1.2方法患者入院后1周内清晨空腹抽取静脉血2 ml，迅速分离血清，-20℃贮存备测，测定前取出标本，待自然复融后检测血清中AFPAFPL3和AFU水平。采用2010型电化学发光免疫分析仪（罗氏宝灵曼公司）及配套AFP化学发光免疫试剂测定AFP；采用AFU速率法检测试剂盒在CX9全自动生化分析仪（德国贝克曼公司）上测定AFU；采用亲和吸附法测定并计算AFPL3［2~4］。结果判断：血清AFP>25 μg/L为阳性，血清AFU>40 U/L为阳性，血清AFPL3>25%为阳性。

　　1.3统计学处理使用SPSS 10.0统计软件包对数据进行统计学处理。各组均数之间的差异比较采用秩和检验，各组之间阳性率比较采用χ2检验，检验水准α＝0.05。

　　2结果

　　49例PHC患者AFP、AFPL3、AFU检测结果显示，AFP、AFU均为阴性，而AFPL3为阳性且经病理证实为PHC者9例，约占AFPL3阳性总数的21％。其中1例CT检查及病理切片显示，病灶直径小于3 cm，为早期病变。

　　2.13组AFP、AFPL3、AFU检测结果的比较PHC组血清AFP、 AFPL3水平高于正常对照组（P<0.001），PHC组AFP水平明显高于慢性乙型肝炎组（P0.001）(表1)。

　　表13组血清AFP、APPL3、AFU水平检测结果（略）

　　2.23组AFP、 AFPL3、AFU阳性检出率PHC组AFPL3的阳性率为85.7%,AFP阳性率为65.3%，AFU阳性率最低，为49.0%(表2)。

　　表23组AFP、AFPL3、AFU阳性检出率（略）

　　2.33组AFP与AFPL3联合检测结果 PHC组患者血清AFPL3检出率较AFP略高，但特异性不高(表3)。

　　表33组AFP与AFPL3检测结果[略]

　　2.4AFP、AFPL3、AFU联合检测PHC阳性检出率3种方法联合检测PHC，阳性检出率达97.0%，且可避免单项检测出现的漏检情况(表4)。

　　表4AFP、AFPL3、AFU联合检测PHC阳性检出率检测[略]

　　3讨论

　　3.1AFPAFP是一种糖蛋白，每分子含两条复合糖链，不同组织合成的AFP糖链组成不同。基于其蛋白质部分的癌胚性，临床采用放射免疫、酶联免疫吸附技术测定AFP的蛋白部分，将其作为肝脏恶性肿瘤诊断的指标，是一种目前公认的诊断肝癌的最佳标志物［5］，作为PHC的辅助诊断指标应用较广，但有30%～40%的肝癌患者血清AFP呈阴性而被漏诊。本组PHC患者AFP阳性率为65.3%，与国内外文献报道的60%～70%相近［6,7］。

　　3.2AFPL31970年，Purves等［8］首先应用淀粉凝胶电泳分离出人的AFP异质体。扁豆凝集素（LCA）反应性AFP与LCA结合位点是门冬酰胺连接的岩藻糖化AFP，在植物凝集素亲和性电泳中位于第三区带，称AFPL3［9］。AFP分子存在异质性，尤其是糖链的差异较大，导致一些PHC患者AFP检测阴性或持续低浓度阳性。PHC患者血清AFPL3含量平均为（49.13±27.20）%（0～100%），非癌肝病患者血清APFL3含量为（93.30±7.66）%，假阳性率为1.6%，PHC患者AFP常升高，但许多良性肝病也可有AFP升高，单凭AFP结果有时很难区分良恶性病变［1,5,6］。检测APFL3水平尤其对于AFP 30～400 μg/L者具有较好的诊断价值，屠振兴等［10］报道35例肝癌病人中只有7例AFP>400 μg/L，而17例AFP<400 μg/L及B超、CT检查阴性的PHC患者检测APFL3后可立即确诊，至少缩短2个月的随访期。

　　3.3AFUAFU属溶酶体酸性水解酶类， AFU超过40U/L应考虑PHC。本组PHC患者AFU阳性率为49.0%，较杨桐树等［11］报道的60%低，分析原因有：（1）是本组病例数较少;（2）所用试剂为进口试剂国内分装而致纯度不足。但在AFP阴性的17例中有8例AFU阳性，两者互为补充，可提高PHC的检出率。

　　3.4AFP、AFPL3、AFU联合检测49例PHC患者AFP、AFPL3联合检测阳性率为92.1%，AFPL3、AFU联合检测阳性率为89.6%，AFP、AFU联合检测阳性率为83.2%，三者联合检测阳性率为97.0%。PHC患者血清AFPL3检出率较AFP略高，但特异性不高，3项标志物同时检测，可明显提高检测的特异性和敏感性，其PHC的阳性检出率可达97.0%。

　　本研究结果显示，AFP、APFL3和AFU联合检测对PHC诊断有意义，平行试验可提高检测敏感度，系列试验可提高检测特异度，本组病例AFU值较杨酮树等［11］报道的低，但能检出AFP、AFPL3阴性的肝癌患者，具有互补性。AFP、AFPL3和AFU联合检测能提高PHC诊断的灵敏度和阳性检出率，对PHC的早期诊断，尤其是AFP阴性肝癌的诊断具有重要的临床应用价值。

　　近年发现血清AFP阴性的PHC有增多趋势［12］，因此开发更新、更特异、更敏感的标志物已成为紧迫的课题，寻找癌胚特异性的同工酶或异质体，寻找特异性亚组成分成为当前肝癌血清标志物研究的方向。

　　参考文献：

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　　［3］张惟杰.复合多糖生化研究技术［M］.第1版.上海：上海科学技术出版社1987.356.

　　［4］张龙翔，张庭芳，李令媛.生化实验方法和技术［M］.第2版.北京：高等教育出版社,1997. 177.

　　［5］沈铮，沈霞.甲胎蛋白及其异质体检测的临床应用价值［J］.上海医学检验杂志，2000，15（6）：361362.

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　　［7］Oka H，Saito A，Ito K，et al. Multicenter prospective analysis of newly diagnosed hepatocellular carcinoma with respect to the percentage of lens culinaris agglutinin reactive alphafetoprotein ［J］. J Gastroenterol Hepatol，2001，16：13781383.

　　［8］Purves LR,Merwe VE,Bersohn I,et al. Variants of αfetoprotein［J］.Lancet,1970,2:464.

　　［9］武田和久. AFP的糖链分析在肝癌诊断上的应用［J］.国外医学临床生物化学与检验学分册，1990，11（2）：2829.

　　［10］屠振兴，殷正丰，崔贞福，等.甲胎蛋白异质体预测肝癌发生的临床价值［J］.第二军医大学学报，1991，12（5）：417419.

　　［11］杨桐树，柳市英，赵宁，等.血清αL岩藻糖苷酶在原发性肝癌诊断中的意义［J］.实用肿瘤学杂志，2000，14（3）：193195.

　　［12］Nomura F, Ishijima M, Kuwa K, et al. Serum desgamma carboxy prothrombin levels determined by a new generation of sensitive immunoassays in patients with smallsized hepatocellular carcinoma［J］. Am J Gastroenterol,  1999， 94(3):650654.

　　新疆医科大学附属肿瘤医院1外三科，2检验科，新疆乌鲁木齐830011

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