答：各种常用方法的优缺点如下：
(1)化学合成dsRNA：优点：快捷，通常6－8天内就可以从供应商处拿到定制的RNA oligo。
(2)体外转录dsRNA：优点：价格相对低廉。缺点：操作困难、耗时。
(3)PCR制备编码shRNA的转录DNAs：优点：经济，较快捷。缺点：这种dsDNA导入细胞有一定难度。
(4)shRNA表达质粒：优点：基因干扰效果持久，经济；缺点：制备耗时；导入效率较低下；还涉及质粒在细胞内的定位、shRNA体内折叠效率，非特异性基因抑制等。

问:siRNA设计的时候应该注意什么？

　答：siRNA设计是一个需要由软件完成的工作，但其中也有一般规律可寻： 1.起始密码子75-100个以后，终止密码子100个以前的片断 2.GC比例在35-50之间，最好不要超过55% 3.设计好的序列必须进行blast同源分析。需要提醒的是，对于任一个靶基因，RNAi的选择都带有一定的随机性。

问：应该使用什么溶剂溶解RNA，水还是缓冲液？
推荐使用1xTE缓冲液（在无RNase的条件下配制 10 mM TrisCl, pH7.5, 0.1 mM EDTA）溶解单链RNA，这将缓冲pH和鳌合金属离子，减少RNA的降解。也可以使用无RNase水，双链的RNA冻干自10 mM Tris-HCL, pH 8.0, 20 mM NaCl, 1 mM EDTA，再次悬浮在适量的水中，RNA浓度到20μm，将恢复到相同的缓冲液。

问：如何在RNA oligo的OD、 nmol和质量间进行换算的？

　答：RNA oligo的OD、 nmol和质量间有精确的公式可以计算，但一般情况下，对于一个21 bp 的siRNA oligo，有如下简单关系：1 OD duplex＝3 nmols＝40ug

　答：现在市场上销售的RNA干扰产品虽然很多，但大体可以分为两类，一类是化学合成的RNA oligo；另一类是依托于分子生物学操作的试剂盒。这两类产品目前都广泛用于RNA干扰研究。作为刚刚进入RNA干扰研究的用户，比较好的研究路线是先针对你要研究的基因，合成一个由4～5对RNA oligo组成的一个RNA oligo 组，用这组RNA oligo筛选出具有明确基因下调作用的特定RNA oligo。下一步，可以根据您的研究需要，选择使用载体或者使用合成相对大量的RNA oligo。一般情况下，如果后继研究希望通过观察基因持续下调研究基因功能，你需要选择稳定表达的载体系统；如果后继研究希望观察一个RNA 干扰片段作为药物的作用和作用结果，就需要合成较大量的RNA oligo。