lonza 特殊 无血清 培养基

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作者：梅 玲

　　【关键词】 ELISA

　　　　HIV抗体检测是用于艾滋病防治的一项重要保证措施。因此,提高实验室检测的准确性,减少假阳性和假阴性反应的发生,对监测、诊断、血液筛查艾滋病来说是很重要的。为了更准确、更严谨地出示检测报告，本HIV初筛实验室在参加省级机构室间质评的同时，还进行室内质量控制。现将本室进行HIV室内质量控制的程序介绍如下。

　　　　1 试剂来源

　　　　1.1 外部对照质控血清

　　　　严格按照《全国艾滋病检测技术规范》2004年版【1】制备弱阳性对照血清、保存。

　　1.2 HIV诊断试剂盒

　　　　由省级HIV实验室指定使用经临床质量评估敏感性和特异性高的试剂。由上海实业科华生物技术有限公司提供，所用试剂盒及内部对照质控血清均在有效期内使用。

　　　　2 实验室设备校准

　　　　2.1 anthos fluido24-600型自动酶标洗板机

　　　　本室根据计量认证质量手册的要求，严格按照作业指导书操作规程进行自校准，并详细填写原始记录，有自校准报告。

　　　　2.2 恒温水浴箱

　　　　调节并控制温度在37℃±2℃之间。

　　　　2.3 微量加样器（Finnpipette）、酶标仪（Reader2010）

　　　　均经省技术监督检测中心检定合格，并在检定周期一年内使用，本室严格按照质量手册中作业指导书的操作规程对微量加样器定期进行期间核查，对酶标仪检测数据进行不确定度分析，从而确保其具有良好的重复性和线性范围。

　　　　3 操作

　　　　(1)严格按照计量认证质量手册中作业指导书的操作规程进行操作。加入样品量要准确，不得混入血细胞，同时每板设阴、阳性对照各2孔，空白对照1孔，质控弱阳性对照血清1孔；震摇15s，37±2℃孵育60±5min（严格掌握温育时间，以免影响结果的精密度和准确性）；置自动洗板机上洗涤，洗板时应保证洗板机管路畅通，加液量均匀；不得随意加减洗板次数（洗板次数少出现假阳性，洗板次数多又会使临界弱阳性变成阴性而漏检）；拍板（以垫纸不湿为宜）；在2h内置于酶标仪读数，双波长450/630nm测OD值。试剂固定同一厂家，购入试剂同时索要厂家的中国药品生物制品检定所批检合格复印件，以保证所用试剂质量，不同批号试剂不得混用。严格按照本中心计量认证手册规定的标准操作规程进行操作。

　　(2)在常规条件下，对同一批外部对照质控血清连续测定20次，获得一组S/CO值，求均数()和标准差(s), 超出2s或3s的数据不应删除。将均值()和标准差(s)分别在质控框架图中标示出来。以S/CO值作纵坐标(Y轴)，每一次试验作横坐标(x轴)，绘制质控图。从第21次起，将每次质控血清的检测结果依次点入该质控框架图中，检验进入质控状态。每一次实验必须使用外部对照质控血清，以便监控实验的重复性和稳定性。同时可以了解各批试剂盒的批间或孔间差异，绘制质量控制图。质控图是把检测数据与已确定的 “控制限”进行比较的图，图中为靶值线、±2S线为警告线，±3S为失控线。并按时间顺序点入本实验室每次实验质控血清的测定值，观察其是否在允许范围内，月底计算当月全部质量控制血清检测结果的S和CV，并进行图形分析和小结，然后将质控图存档保存。

　　　　4 讨论

　　　　(1)室内质控是实验室内部对所有影响检测质量的各个环节进行系统控制，目的是控制本实验室常规工作的精密度，提高常规工作前后的一致性。在ELISA法检测HIV试验中，当质控血清的S/CO值波动在 +2S范围内，表明工作正常，结果可靠，若超过 +2S范围时，系统处于告警状态，应予注意，及时分析原始数据，对具体检验过程进行回顾性分析，查找原因后给予纠正并重复测试，若超过 +3S范围时，系统处于失控状态，本次实验结果不能被接受，可能是系统误差、随机误差或外部对照滴度下降造成。

　　　　(2)引起室内质控失控的原因很多。如：换用新批号诊断试剂盒或标准血清、仪器设备未经检定、校准或测试、温育时间和温度不准确、新的检验人员、质控标准血清反复冻融等，此时要及时查找原因予以纠正。

　　　　(3)月底计算当月测定结果的S和CV，并与其他月份同一批号质控标准血清所得S和CV相比较，通过图形资料对比进行误差分析，从而发现常规检测的精密性和准确性是否发生了变化。

　　　　(4)所用的质控弱阳性对照血清为低温冷冻保存的液体，使用时要融化彻底并充分混匀，达到室温方可使用。室内质量控制是通过对质控弱阳性对照血清的检测和分析，推断和控制常规标本的检测质量，因此，质控弱阳性对照血清与检测标本必须同等对待。每天检测结束后，检测者应把当天质控弱阳性对照血清测定结果画在图上，确定在允许范围内，方可发出标本检测报告，这样做可使检测者及时分析质量控制图中出现的各种问题，采取相应措施。

　　　　(5)通常把临界值上下10％的范围定为检测结果灰区。对于检测过程中出现的灰区标本均应进行重复测试，以减少假阳性和假阴性结果的出现，并对实验结果和过程进行记录并存档保存。

　　　　(6)要做好实验室的质量保证，单纯靠室内质控是不行的，还要建立健全实验室的各项规章制度，掌握质量控制知识，做好预防性质量控制，保证标准品的质量等全过程的质量控制，从而提高检验质量。

　　【参考文献】

　　　　1 全国艾滋病检测技术规范.中国疾病预防控制中心，2004，12.

　　　　作者单位： 563000 贵州遵义，遵义市红花岗区疾病预防控制中心

　　　　【中图分类号】 R181.9

　　　　HIV抗体检测是用于艾滋病防治的一项重要保证措施。因此,提高实验室检测的准确性,减少假阳性和假阴性反应的发生,对监测、诊断、血液筛查艾滋病来说是很重要的。为了更准确、更严谨地出示检测报告，本HIV初筛实验室在参加省级机构室间质评的同时，还进行室内质量控制。现将本室进行HIV室内质量控制的程序介绍如下。

　　　　1 试剂来源

　　　　1.1 外部对照质控血清

　　　　严格按照《全国艾滋病检测技术规范》2004年版【1】制备弱阳性对照血清、保存。

　　1.2 HIV诊断试剂盒

　　　　由省级HIV实验室指定使用经临床质量评估敏感性和特异性高的试剂。由上海实业科华生物技术有限公司提供，所用试剂盒及内部对照质控血清均在有效期内使用。

　　　　2 实验室设备校准

　　　　2.1 anthos fluido24-600型自动酶标洗板机

　　　　本室根据计量认证质量手册的要求，严格按照作业指导书操作规程进行自校准，并详细填写原始记录，有自校准报告。

　　　　2.2 恒温水浴箱

　　　　调节并控制温度在37℃±2℃之间。

　　　　2.3 微量加样器（Finnpipette）、酶标仪（Reader2010）

　　　　均经省技术监督检测中心检定合格，并在检定周期一年内使用，本室严格按照质量手册中作业指导书的操作规程对微量加样器定期进行期间核查，对酶标仪检测数据进行不确定度分析，从而确保其具有良好的重复性和线性范围。

　　　　3 操作

　　　　(1)严格按照计量认证质量手册中作业指导书的操作规程进行操作。加入样品量要准确，不得混入血细胞，同时每板设阴、阳性对照各2孔，空白对照1孔，质控弱阳性对照血清1孔；震摇15s，37±2℃孵育60±5min（严格掌握温育时间，以免影响结果的精密度和准确性）；置自动洗板机上洗涤，洗板时应保证洗板机管路畅通，加液量均匀；不得随意加减洗板次数（洗板次数少出现假阳性，洗板次数多又会使临界弱阳性变成阴性而漏检）；拍板（以垫纸不湿为宜）；在2h内置于酶标仪读数，双波长450/630nm测OD值。试剂固定同一厂家，购入试剂同时索要厂家的中国药品生物制品检定所批检合格复印件，以保证所用试剂质量，不同批号试剂不得混用。严格按照本中心计量认证手册规定的标准操作规程进行操作。

　　(2)在常规条件下，对同一批外部对照质控血清连续测定20次，获得一组S/CO值，求均数()和标准差(s), 超出2s或3s的数据不应删除。将均值()和标准差(s)分别在质控框架图中标示出来。以S/CO值作纵坐标(Y轴)，每一次试验作横坐标(x轴)，绘制质控图。从第21次起，将每次质控血清的检测结果依次点入该质控框架图中，检验进入质控状态。每一次实验必须使用外部对照质控血清，以便监控实验的重复性和稳定性。同时可以了解各批试剂盒的批间或孔间差异，绘制质量控制图。质控图是把检测数据与已确定的 “控制限”进行比较的图，图中为靶值线、±2S线为警告线，±3S为失控线。并按时间顺序点入本实验室每次实验质控血清的测定值，观察其是否在允许范围内，月底计算当月全部质量控制血清检测结果的S和CV，并进行图形分析和小结，然后将质控图存档保存。

　　　　4 讨论

　　　　(1)室内质控是实验室内部对所有影响检测质量的各个环节进行系统控制，目的是控制本实验室常规工作的精密度，提高常规工作前后的一致性。在ELISA法检测HIV试验中，当质控血清的S/CO值波动在 +2S范围内，表明工作正常，结果可靠，若超过 +2S范围时，系统处于告警状态，应予注意，及时分析原始数据，对具体检验过程进行回顾性分析，查找原因后给予纠正并重复测试，若超过 +3S范围时，系统处于失控状态，本次实验结果不能被接受，可能是系统误差、随机误差或外部对照滴度下降造成。

　　　　(2)引起室内质控失控的原因很多。如：换用新批号诊断试剂盒或标准血清、仪器设备未经检定、校准或测试、温育时间和温度不准确、新的检验人员、质控标准血清反复冻融等，此时要及时查找原因予以纠正。

　　　　(3)月底计算当月测定结果的S和CV，并与其他月份同一批号质控标准血清所得S和CV相比较，通过图形资料对比进行误差分析，从而发现常规检测的精密性和准确性是否发生了变化。

　　　　(4)所用的质控弱阳性对照血清为低温冷冻保存的液体，使用时要融化彻底并充分混匀，达到室温方可使用。室内质量控制是通过对质控弱阳性对照血清的检测和分析，推断和控制常规标本的检测质量，因此，质控弱阳性对照血清与检测标本必须同等对待。每天检测结束后，检测者应把当天质控弱阳性对照血清测定结果画在图上，确定在允许范围内，方可发出标本检测报告，这样做可使检测者及时分析质量控制图中出现的各种问题，采取相应措施。

　　　　(5)通常把临界值上下10％的范围定为检测结果灰区。对于检测过程中出现的灰区标本均应进行重复测试，以减少假阳性和假阴性结果的出现，并对实验结果和过程进行记录并存档保存。

　　　　(6)要做好实验室的质量保证，单纯靠室内质控是不行的，还要建立健全实验室的各项规章制度，掌握质量控制知识，做好预防性质量控制，保证标准品的质量等全过程的质量控制，从而提高检验质量。

　　【参考文献】

　　　　1 全国艾滋病检测技术规范.中国疾病预防控制中心，2004，12.

　　　　作者单位： 563000 贵州遵义，遵义市红花岗区疾病预防控制中心