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康宁/Corning CellGro® 澳洲来源胎牛血清 (康宁)康宁/Corning® 淋巴细胞无血清培养基
血清中含有各种血浆蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生长因子、激素、无机物等，这些物质对促进细胞生长或抑制生长活性是达到生理平衡的。胎牛血清取自剖腹产的胎牛，含有丰富的细胞生长必须的营养成份，常用于动物细胞的体外培养，具有极为重要的功能。目前实验室用胎牛血清产品种类繁多，本专题介绍了几个常用品牌的胎牛血清产品以及其在使用中常见的一些问题，希望能给大家带来一定帮助!
一、胎牛血清的标准、成分及其功能简介：在常规动物细胞培养实验中所用到的细胞培养基往往需要加入胎牛血清。蛋白质是牛血清的主要成分，它对于细胞的生长起到关键的作用。我们常常听说的还有小牛血清，那么胎牛血清和小牛血清有没有区别？它们的不同点又在哪里呢？本文档明确定义了什么样的血清才是标准的胎牛血清，也说明了胎牛血清的功能到底有哪些？ 胎牛血清 一、胎牛血清 各项质量指标符合2005版《中华人民共和国药典》第三部附录的要求。 1、性状、外观 浅黄色澄清、无溶血、无异物稍粘稠液体。 2、蛋白质含量 3.5%～5.0%( w/v) 3、血红蛋白含量 ≤ 0.02%( w/v) 4、无菌检验 阴性 5、支原体检验 阴性 6、细菌内毒素 ≤5(EU/ml) 7、牛腹泻病毒 阴性 8、大肠杆菌噬菌体 阴性 9、支持细胞增殖(Sp2/0-Ag14) 生长曲线(接种浓度)最大增殖浓度≥2.5×106 个/ml 细胞倍增时间 ≤15h 克隆率 ≥85% 二、血清的主要成分 血清是由血浆去除纤维蛋白而形成的一种很复杂的混合物，其组成成份虽大部分已知，但还有一部分尚不清楚，且血清组成及含量常随供血动物的性别、年龄、生理条件和营养条件不同而异。血清中含有各种血浆蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生长因子、激素、无机物等，这些物质对促进细胞生长或抑制生长活性是达到生理平衡的。 胎牛血清应取自剖腹产的胎牛;新牛血清取自出生24小时之内的新生牛;小牛血清取自出生10-30天的小牛。 显然，胎牛血清是品质最高的，因为胎牛还未接触外界，血清中所含的抗体、补体等对细胞有害的成分最少。 三、功能 牛血清是细胞培养中用量最大的天然培养基，含有丰富的细胞生长必须的营养成份，常用于动物细胞的体外培养，具有极为重要的功能。 1.提供对维持细胞指数生长的激素，基础培养基中没有或量很少的营养物，以及主要的低分子营养物。 2. 提供结合蛋白，能识别维生素、脂类、金属和其他激素等，能结合或调变它们所结合的物质活力。 3.有些情况下结合蛋白质能与有毒金属和热原质结合，起到解毒作用。 4.是细胞贴壁、铺展在塑料培养基质上所需因子来源。 5.起酸碱度缓冲液作用。 6.提供蛋白酶抑制剂，使在细胞传代时使剩余胰蛋白酶失活，保护细胞不受伤害。
二、小牛血清和胎牛血清的区别摘要： 胎牛血清(Fetal Bovine Serum ,FBS) 是在屠宰怀孕母牛的时候,通过心脏穿刺采血获取的胎牛的血清，新生牛(小牛)血清(Calf serum, CS)采自出生10至14 天的小牛。 1、来源不同： 2、胎牛血清，小牛血清和新生牛血清三种之间的区别： 3、最为重要的一点是： 4、根据牛出生时间和血清采制分离方法分为： 血清是血浆去除纤维蛋白而形成的一种很复杂的混合物，其组成成份虽大部分已知，但还有一部分尚不清楚，且血清组成及含量常随供血动物的性别、年龄、生理条件和营养条件不同而异。血清中含有各种血浆蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生长因子、激素、无机物等，这些物质对促进细胞生长或抑制生长活性是达到生理平衡的。对血清的成分和作用的研究虽有很大进展，但仍存在一些问题。 胎牛血清是品质最高的，因为胎牛还未接触外界，血清中所含的抗体、补体等对细胞有害的成分最少。 一般选用血清种类可以根据ATCC及实验需要来选择 其实，除了一些比较娇贵的细胞，如干细胞之类的，其余的大部分细胞培养，用国产的足以!而且四季青之类的口碑也颇好，性能也比较稳定，所以很多实验室都在用。抛开法好一点的文章来说，这是个明智的选择。如果想做好文章，那就要和国际接轨了，烧一点钱，影响因子提高点，也值啊!
三、胎牛血清产品等级介绍摘要： 本文将胎牛血清分成五个级别，并详细介绍各级别的血清产品和特点。 第一类，最高级别，是专门用于干细胞的特级胎牛血清 1、Hyclone的特级胎牛血清 目前，性能最好的血清，还是要说说Hyclone的特级胎牛血清，货号是SH30070.03，它是Hyclone的“招牌菜”。 Hyclone特级胎牛血清(Defined FBS)，货号SH30070，是世界上唯一经过40纳米过滤的顶级胎牛血清，极佳的促细胞生长作用及产品稳定性。内毒素含量≤10EU/ml，血红蛋白含量≤10mg/dl。 此血清可以广泛用于各种细胞培养，包含任何干细胞系的培养。 因为美国那边有疯牛病，无法进口。实际上，40nm的过滤，已经将全部的病毒、支原体处理掉，同时，是用于科研级别的，洁净程度非常高。不让进口，只是我们国家为了保护本国畜牧业的一个手段，针对牛肉方面，而胎牛血清是受到殃及而已。 2、Gibco的特级胎牛血清 稍次一点的是Gibco公司在美国原装生产的特级胎牛血清，这款血清，货号是16000-044，是100nm过滤3次，内毒素和血红蛋白含量都可以与Hyclone的SH30070.03相媲美。也可以用于培养大部分的干细胞系。同样是美国来源，所以渠道特殊。 3.TCB的特级胎牛血清 TCB(Tissue Culture BioLogicals)公司作为一家生物行业类的著名供应商，成立于1978年，大部分血清的采集和加工都在加利福尼亚。每一批的原材料都经过严格筛选，所有的产品都在FDA认证的cGMP车间进行! TCB 公司一贯重视产品质量，为客户提供最优质的血清及相关产品，经过多年的发展，公司产品种类丰富，各种品质的血清和培养基能满足所有实验室的需求。 TCB 公司经过美国食品药品监督管理局(FDA)和美国农业部(USDA)的授权认证。与人相关的产品符合疾控中心(CDC)的相关法规。 TCB是美国农业部(USDA)动植物检疫局(APHIS)兽医处(VS)下属的国家动物进出口中心(NCIE)的检疫认可单位，允许可控原材料、组织、细胞等的进出口贸易! 4. Bioind特优级胎牛血清 血源来自北美和澳大利亚BioInd公司的生产完全符合GMP的要求，并通过ISO9000:2001和ISO 13485:2003质量认证。 以安全，稳定，高效为原则的BioInd公司，所有的产品质量均完全符合国际标准。Biological Industries主营细胞培养类产品，BioInd工厂加工的胎牛血清均符合USDA标准及欧洲标准血清。根据美国农业部标准，原始血清均采自未发生疯牛病(BSE)和口蹄疫(FMD)疫情的国家。Biological Industries三步滤菌处理法，最后的过滤步骤为连续通过三个100纳米的滤膜。血清生产的洁净级别为100级。所有分装工作台都通过高效微粒空气过滤器过滤，并保持正压分装环境要对总微粒、悬浮微粒数和压力进行监控。分装之后，终产品迅速-20度冻存，并隔离，直到所有的质量控制检测完成. 第二类，优等胎牛血清 给您推荐几款，如下： 1、Hyclone的加拿大优等胎牛血清 性价比最高的是Hyclone加拿大优等胎牛血清(CharacterizendFBS)SH30396.03 血清采自加拿大，由hyclone公司总部的员工采集加工，采集方法，加工过程，检定标准与美国原产优等胎牛血清完全一致，市场价格低于美国原产的。经过3次100nm过滤，内毒素含量≤25EU/ml，血红蛋白含量≤25mg/dl 2、Hyclone的南美优级胎牛血清 大体与加拿大的优等血清是一样的，级别也非常相似，货号是sv30087.02，该胎牛血清来源于南美洲，以封闭的心脏穿刺方式采集，产品经3次100nm 过滤，经严格检测确保无支原体，细菌病毒检测依据美国药典(USP)和美国联邦法规第九篇(9CFR)，内毒素含量≤10 EU/ml，血红蛋白含量≤20 mg/dl，完全符合美国 HyClone® 优等胎牛血清的检测标准。 3、Gibco的澳大利亚胎牛血清 情况和Hyclone的澳大利亚胎牛血清差不多，市场价也是3200元/500ml左右。 这一级别的血清，也能用于干细胞培养，可是，不象特级胎牛血清那么优秀。 因为，此胎牛血清属于澳大利亚生产的，不在疫区，可以正常报关进口，目前没有受到任何影响，所以，就目前而言，算是最好的胎牛血清了，有不少客户都此血清来培养干细胞，效果还是比较不错。 4、TCB的优级胎牛血清 情况和Hyclone的澳大利亚胎牛血清差不多，市场价也是2300元/500ml左右。 这一级别的血清，也能用于干细胞培养，可是，不象特级胎牛血清那么优秀。 第三类，一般级别的进口胎牛血清 1、Hyclone的南美胎牛血清 目前，市场上用的最多的Hyclone血清是南美胎牛血清(FBS)SV30087 ，此血清采自南美，在国内(兰州)过滤并测试检验，经三次100纳米过滤，根据中国商标法的规定标贴中文标签，内毒素含量≤10EU/ml,血红蛋白含量≤20mg/d。 此血清广泛用于各种肿瘤细胞的培养，还没有资料记载能够用于干细胞，也听说有少数人用于干细胞培养的，不过，因为本身血红素比较高，所以，最好不要用于干细胞， 2、Gibco的南美胎牛血清 这款血清，是Gibco针对Hyclone南美胎牛血清做的，价格比较贵，好像是1780元/500m。 3、Gemini的胎牛血清 4、TCB的胎牛血清 5、PAA的胎牛血清 6、JRH澳洲胎牛血清 第四类，国产的各种系列胎牛血清 国产的胎牛血清，国内没有严格意义的胎牛血清，胎牛血清本身是需要穿刺取血的，而国内都是剖腹产出胎牛，8小时左右取血，然后，进行过滤分装。 所以，国产的胎牛血清不是严格意义的胎牛血清。 价格便宜但是遇到的问题非常多。 第五类，其他血清 依科赛，思洳，超级新生牛血清，可以用于简单的细胞培养。
四、胎牛血清使用中的常见问题摘要： 文章介绍了储存和解冻血清方法;血清中包含絮状沉淀怎么处理;实验室如何选择适合的血清等选择和使用血清时的常见问题及注意事项。 1、 如何储存和解冻血清才不会使产品质量受损? 将血清从冷冻箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室温下使之全融。但必须注意的是，融解过程中必须规则地摇晃均匀。 长时间储存在2-8℃时，血清中的各种蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纤维蛋白原、玻粘连蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可见的混浊。因此，推荐在-20℃以下储存血清，并避免反复冻融。 我们建议血清应保存在-2O℃。若存放于4℃时，请勿超过一个月。若一次无法用完一瓶，建议无菌分装血清至恰当的灭菌容器内，再放回冷冻。 2、血清中包含絮状沉淀，它们是什么，怎么处理? 沉淀包含纤维蛋白和脂蛋白。这是正常特性，不会影响产品性质。要除去沉淀，离心血清(400g，1-2分钟)或者简单的让其沉淀在瓶子底部，将血清小心的转移到另一个无菌瓶里(一般不建议采用过滤的方法除去沉淀，因为沉淀会堵塞滤膜而无法过滤)。大多情况轻轻摇动沉淀并加热至37℃就会再溶解。所以，使用产品时要摇动并加热血清至37℃，沉淀会自然消失。 3、实验室如何选择适合的血清? 国内一致认为HYCLONE的血清是最好的，但是根据我在北美的经历，国外一般认为GIBCO比HYCLONE好，所以并不是价格决定质量，但是总的来说这两种价格普遍偏贵，一般不是太娇气的细胞，国产的就够用了。此外，由于国内HYCLONE，GIBCO并没有生产线，我们只能从代理商那里买，而代理商又鱼龙混杂，所以买到假货的可能性也很大。所以，我一般会从直销员那里买血清，有的国外生物公司由于刚刚进入中国，知名度不高，但是其实在国外已经做得很不错了，如Wisent等，他们在国内有办事处，我会从那里拿，血清的品质和HYCLONE不相上下，但价格相对优惠很多。 4、 如何避免血清中产生沉淀? 按如下操作可避免沉淀的产生： (1)解冻血清时，请随时将之摇晃均匀，使温度及成分均一，减少沉淀的发生。 (2) 血清分装冻存时，须规则摇晃均匀(小心勿造成气泡)，使温度与成分均一。 (3) 勿直接由-20℃直接至37℃解冻，因温度改变太大，容易造成蛋白质凝结而发生沉淀。 (4) 勿将血清置于37℃太久，否则血清会变得浑浊，同时血清中许多较不稳定的成份也会因此受到破坏，从而影响血清的品质。 (5) 血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以无须做此步骤。 (6) 若必须做血清的热灭活，请遵守56℃，30分钟的原则，并且随时摇晃均匀。温度过高，时间过久或摇晃不均匀，都会造成沉淀物的增多。 5、 培养基中添加了血清和抗生素后，可长期保存吗? 一旦您在新鲜培养基中添加了血清和抗生素时，您应该在两到三周内使用它。因为一些抗生素和血清中的基本成分在解冻后就开始降解。 6、 为什么要热灭活血清? 加热可以灭活补体系统。激活的补体参与溶解细胞事件，刺激平滑肌收缩，细胞和血小板释放组胺，激活淋巴细胞和巨噬细胞。在免疫学研究，培养ES细胞、平滑肌细胞时，推荐使用热灭活血清。 7、 有必要做热灭活吗? 实验显示，经过正确处理的热灭活血清，对大多数的细胞而言是不需要的。经此处理过的血清对细胞的生长只有微小的促进，或完全没有任何作用，甚至通常因为高温处理影响了血清的质量，而造成细胞生长速率的降低。而经过热处理的血清，沉淀物的形成会显著的增多，这些沉淀物在倒置显微镜下观察，像是“小黑点”，常常会让研究者误以为是血清遭受污染，而把血清放在37℃环境中，又会使此沉淀物更增多，使研究者误认为是微生物的分裂扩增。 若非必须，可以不需要做热处理这一步。不但节省时间，更确保血清的质量! 8、细胞培养中出现黑点是污染吗?如何处理? 一旦您在细胞培养的过程中发现有黑点生成，首先，要肉眼观察培养基是否混浊，然后，在镜下观察培养细胞生长的状态，黑点是否游动。如果细胞被污染，微生物则会大量繁殖，培养基就会迅速变黄、变混浊。污染包括细菌污染、支原体污染等。 如果在镜下观察细胞，生长状态良好，与黑点出现前相比，没有任何变化，那么，黑点的出现可能与以下几种情况有关： (1)细胞生长过老，破碎的细胞残骸; (2)血清质量不好，反复冻融的结果; (3)配制培养基的pH值偏高，不宜细胞生长; (4)配制培养基的水质、容器不合格。可应用离心、过滤的方法去除这些黑点; (5)培养原代细胞中出现小黑点，可能是原代组织中的杂质，多次传代可以消除。 9、 细胞培养中如何防止黑点生成? (1) 尽可能地减少血清冻融次数。 (2) 培养基无需37℃水浴。 (3) 培养基保持最佳PH值7.0- 7.2。 (4) 严格控制配制培养基的水质，容器定期刷洗。 (5) 掌握细胞传代的最佳时机，细胞切勿生长过老。 10、小牛血清和胎牛血清有何区别与注意事项? 来源不同：胎牛血清(Fetal Bovine Serum ,FBS) 是在屠宰怀孕母牛的时候,通过心脏穿刺采血获取的胎牛的血清，新生牛(小牛)血清(Calf serum, CS)采自出生10至14 天的小牛。 组份与比例不同：两者所含的促细胞生长因子、促贴附因子、激素及其他活性物质等组份与比例不同，用途与用法不同：某些细胞必需胎牛血清才能生长，而有些细胞只需小牛血清即可，使用浓度不同，一般在5%-10%，有特殊要求的浓度在20%。 血清保存和使用须注意：血清应保存在-5℃至-20℃，若存放在4℃不可超过一个月。解冻血清时 ，应先将血清至于2-8℃冰箱，并经常摇匀使之溶解，然后至室温放置使之升温，绝对不可将冷冻的血清直接放入37℃水浴或者温箱中，如放在37℃解冻，颜色加深，粘稠度也会增加，血清在解冻和热灭活后，应按用量分装并于-20℃保存，避免反复冻融。 康宁/Corning® 淋巴细胞无血清培养基康宁/Corning CellGro® 澳洲来源胎牛血清 (康宁) |
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