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赵裕栋，周俊，何璟 * 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室，武汉430070 摘要:【目的】土壤中未培养微生物约占总量的99%，这就意味着绝大多数微生物资源还未得到开发和利用。本研究通过优化土壤微生物总DNA的提取方法，获得较高质量的DNA，为后期研究土壤微生物的多样性及构建大插入片段的宏基因组文库奠定基础。【方法】通过综合比较已报道的微生物DNA提取方法的优缺点，我们设计出一种新的提取方案。对提取过程中的几个关键步骤进行了优化，包括联合使用SDS-CTAB和溶菌酶一起来破细胞，利用氯仿除蛋白，使用PVPP柱纯化DNA等。比较分析了优化后的方法和3种已报道方法所获得的土壤总DNA的产量、纯度及片段大小。【结果】优化后的方法所获得的土壤DNA质量明显有所提高:每克土壤最高能提取95 gDNA，A260/A280和A260/A230比值更接近理想水平，PCR扩增能够得到明显的目标条带，DNA片段最大能达到100kb左右。【结论】通过比较分析，最终确立了一种较理想的土壤微生物总DNA提取方法，为更好地开发利用土壤未培养微生物资源提供了有力工具。
关键词:土壤微生物，eDNA抽提，DNA的产量及质量，PCR扩增，大片段DNA 中图分类号:Q93-3 文献标识码:A 文章编号:0001-6209(2012)09-1143-08
........... 详见打开附件
基金项目:国家自然科学基金(30800020，30970059) ;教育部留学回国人员科研启动基金项目(［2009］1590) ;教育部新世纪人才支持计划项目(NCET-08-0779) ;中央高校基本科研业务费专项资金项目(2009PY006) * 通信作者。Tel: +86-27-87280163;E-mail:hejingjj@mail． hzau． edu． cn 作者简介:赵裕栋(1986－) ，男，江西省九江人，2009级硕士研究生，研究方向为土壤微生物宏基因组学。E-mail:zyd3894816@yahoo． cn 收稿日期:2012-03-31;修回日期:2012-05-11
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