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土壤DNA提取试剂盒 (点击进入)
FastDNA SPIN Kit for Soil使用方法
1. 加入500 mg土壤到Lysing Matrix E管中。加入978 μl Sodium Phosphate Buffer(磷酸钠缓冲液)和122 μl MT Buffer(MT缓冲液)。
注意1:因为FastPrep®仪器的剧烈运动,在Lysing Matrix E管内会形成巨大的压力,样品和基质的总体积不能超过管体积的7/8;留一些空间也会提高混匀效果。
裂解:加入978 μl Sodium Phosphate Buffer(磷酸钠缓冲液)和122 μl MT Buffer(MT缓冲液)。
2. 在FastPrep®中处理上述离心管,速度5.5,30秒。
3. Lysing Matrix E管离心14000g×10分钟。
注意2:对于大样品可延长振荡时间到15分钟。
4. 将上清液转移到一个新的2ml离心管(自备)中,加入250μl PPS,并用手摇10次进行混合。
5. 离心14000g×5分钟,至形成球状沉淀物,将上清液转移到一个新的5ml离心管(自备),并加入1ml Binding Matrix Suspension(在用之前重悬Binding Matrix Suspension)。
6. 放到旋转体或用手颠倒2分钟,使DNA附着到基质上,把离心管放到架子上静置3分钟。
7. 小心去除500μl上清,避免扰动沉淀的Binding Matrix,重悬剩余的上清;转移大约600μl的混合液到一个SPINTM Filter中,离心14000g×1分钟;将SPINTM Filter下面catch tube中的液体倒掉;重复上述过程直到剩余混合液全部转移离心完(1.5mL污泥样品一般要转移三次)。
8. 加入500μl SEWS-M到SPINTM Filter中,离心14000g×1分钟;将SPINTM Filter下面catch tube中的液体轻轻地倒掉,再离心14000g×2分钟,去除基质中的SEWS-M。
9. 将SPINTM Filter放到一个新的Catch Tube中,在室温下风干SPINTM Filter 5分钟。
10. 加入50μl DES(DNase/Pyrogen Free Water),用移液枪枪头在滤膜上轻轻搅动,使滤膜上的沉淀物重悬,从而使DNA有效洗提;离心14000g×1分钟,使DNA转移到Catch Tube中。
需要准备:
灭菌:2ml离心管,5ml离心管,200μl ,1000μl枪头,纯水
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