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FastDNA SPIN Kit for Soil (土壤DNA提取试剂盒)使用说明

作者:admin 来源:本站 发布时间: 2014-10-13 09:57  浏览次数:
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FastDNA SPIN Kit for Soil使用方法
 
1. 加入500 mg土壤到Lysing Matrix E管中。加入978 μl Sodium Phosphate Buffer(磷酸钠缓冲液)和122 μl MT BufferMT缓冲液)。  
注意1:因为FastPrep®仪器的剧烈运动,在Lysing Matrix E管内会形成巨大的压力,样品和基质的总体积不能超过管体积的7/8;留一些空间也会提高混匀效果。
  
裂解:加入978 μl Sodium Phosphate Buffer(磷酸钠缓冲液)和122 μl MT BufferMT缓冲液)。
  
2. FastPrep®中处理上述离心管,速度5.530秒。  
 
3. Lysing Matrix E管离心14000g×10分钟。
注意2:对于大样品可延长振荡时间到15分钟。  
 
4. 将上清液转移到一个新的2ml离心管(自备)中,加入250μl PPS,并用手摇10次进行混合。
 
5. 离心14000g×5分钟,至形成球状沉淀物,将上清液转移到一个新的5ml离心管(自备),并加入1ml Binding Matrix Suspension(在用之前重悬Binding Matrix Suspension)。
 
6. 放到旋转体或用手颠倒2分钟,使DNA附着到基质上,把离心管放到架子上静置3钟。
  
7. 小心去除500μl上清,避免扰动沉淀的Binding Matrix,重悬剩余的上清;转移大约600μl的混合液到一个SPINTM Filter中,离心14000g×1分钟;将SPINTM Filter下面catch tube中的液体倒掉;重复上述过程直到剩余混合液全部转移离心完(1.5mL污泥样品一般要转移三次)。  
 
8. 加入500μl SEWS-MSPINTM Filter中,离心14000g×1分钟;将SPINTM Filter下面catch tube中的液体轻轻地倒掉,再离心14000g×2分钟,去除基质中的SEWS-M  
 
9. SPINTM Filter放到一个新的Catch Tube中,在室温下风干SPINTM Filter 5分钟。  
 
10. 加入50μl DESDNase/Pyrogen Free Water),用移液枪枪头在滤膜上轻轻搅动,使滤膜上的沉淀物重悬,从而使DNA有效洗提;离心14000g×1分钟,使DNA转移到Catch Tube中。  
 
需要准备:
 
灭菌:2ml离心管,5ml离心管,200μl 1000μl枪头,纯水
 

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