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做酵母双杂在二缺培养液中酵母摇成球状,为什么呀?

作者:admin 来源:本站 发布时间: 2015-06-25 08:39  浏览次数:
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 本人现在在做酵母双杂,将AD和BK的载体导入后,在二缺板上长了,然后想在二缺液中摇起来点四缺板,但是酵母聚集成了球状,不是分散的,有哪位见过这种情况??急求

 

建议参考德国的酵母双杂交系统
特点和优点:
1.  可以筛选不同蛋白-蛋白之间相互作用的强度;
2.  利用铜诱导的CUP1/ACE1系统能更有效的检测体内蛋白相互作用;
3.  利用铜抗性这种严格的筛选,会出现很少的假阳性;
4.  利用GFP这种绿色荧光蛋白的报告基因,筛选阳性菌株可以节省大量的时间;
5.  筛选阳性菌株不需要外部酶底物,如X-Gal;
6.  适合高通量的筛选分析。
产品介绍:
        酵母双杂交系统是一种用于筛选体内蛋白-蛋白之间相互作用的方法,它依赖于DNA结合结构域和DNA激活结构域的分离,并将这两个结构域基因分别与两个蛋白基因融合在一起,如果两种蛋白能够相互作用,就会使这两个结构域重组成一个有活性的转录因子复合物,这样,就会使报告基因得以表达。
MoBiTec的ACE1双杂交系统是一个强大的工具,它可以用于新基因的发现和功能分析,而且可以有效的鉴别体内蛋白-蛋白的作用。它将铜诱导的转录因子ACE1和铜抗性CUP1基因与作为报告基因绿色荧光蛋白GFP基因结合起来。两种相互作用的蛋白分别与ACE1的DNA结合结构域和DNA激活结构域相融合,从而使我们可以通过下面的方法筛选:1.在含铜的培养基上生长的细胞;2.依赖铜表达的强荧光GFP可以通过紫外光检测到。
因此,这种新技术,可以很有效的通过一步法筛选可能的阳性表达,即在含有铜的培养基上生长并发出绿色荧光的菌株。它是一种快速、高灵敏度和更值得信赖的检测方法。不断改变铜浓度还可以筛选出不同蛋白之间相互作用的强度。
            
本网链接
http://www.bitebo.com/a/gb2312/product/MoBiTec/2010/0913/3651.html

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