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土壤DNA抽提试剂盒使用说明书

作者:admin 来源:本站 发布时间: 2015-09-17 22:15  浏览次数:
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1.Weigh 500 mg of glass beads in a 15 ml centrifuge tube, add 0.2-0.5 g soil sample. Add 1 ml Buffer SLX Mlus. Vortex at maximum speed for 3-5 minute to lyse sample. For the best result, A Mixer Mill,such as Fastprep-24,Mixer Mill 300, should be used.
称取500毫克的玻璃珠在15毫升离心管,添加0.2 -0.5 g土壤样品。加入1毫升SLX Mlus缓冲液。最大速度下搅拌3 - 5分钟直到样品溶解。为达到最佳效果,需要用到搅拌磨,如Fastprep-24、Mixer Mill 300。

2.Add 100 ul Buffer DS and vortex to mix.
加入100ulDS缓冲液,搅拌混匀

3.Incubate at 70 ℃ for 10 minute. Briefly vortex the tube once during the incubation. For some difficult lysis bacterial. Increase the temperature to 90 .
70 ℃ 培养10分钟。在培养的过程中稍微地搅拌离心管一次,对一些比较难溶解的细菌,将温度调至90℃。

4.Centrifuge at 3000 rpm for 3 min at room temperature. Transfer 800 ul the supernatant into a new 2 ml tube and add 270 ul Buffer SP2. 
Mix the sample throughly by vortexing.室温下3000rpm离心3分钟。转移800ul上清液到一个新的2 ml 管,然后加入270 ul SP2 缓冲液。搅拌,彻底地混匀样品。

5.Incubate in ice for 5 min. Centrifuge at full speed (13,000 ×g) in a microcentrifuge  for 5 min at 4 .
冰上孵育5分钟。在微离心机下,4℃全速(13,000 g)离心5分钟。

6.Carefully transfer supernatant to a new 2 ml tube and add 0.7 volume of isopropanol. Mix throughly by inverting tube for 20 -30 times. If the soil contains very low DNA, incubate the sample at -20℃ for 1 hour.
小心地转移上清液到一个新的 2 ml 管,然后加0.7体积的异丙醇。通过反向管彻底地混合20-30次。假如土壤中含少量的DNA,需要在-20℃ 孵育1h

7.Precipitate DNA by centrifuge at full speed (13,000 ×g) for 10 minute at 4 ℃ 
℃下全速(13,000 ×g)离心10分钟,沉淀DNA

8.Carefully discard the supernatant and make sure not dislodge the DNA pellet. Invert the tube on a absorbent paper for 1 minute to drain the liquid. It is not necessary to dry the DNA pellet.小心地弃掉上清液,确保不搅动DNA沉淀。倒置离心管在吸水纸上分钟,使液体流尽。不需要干燥DNA沉淀。

9.Add 200 ul of Elution Buffer to the tube and vortex for 10 seconds.Incubate at 65℃ for 10- 20 minutes to dissolve the DNA pellet.加 200 ul 洗脱缓冲液,然后搅拌10秒钟。在 65℃ 孵育10-20 分钟,溶解DNA 沉淀。

10.Add 50 -100 ul of HTR Reagent. Mix throughly by vortexing for 10 minute. Note :completely resuspend HRT Reagent by shaking the bottle before use. 
加 50- 100ul HTR 试剂,搅拌10分钟,彻底混匀。注意:用前摇动瓶子,充分悬浮HTR 试剂。
11.Incubate at room temperature for 2 minutes. Centrifuge at full speed (13,000 ×g) for 2 minutes.室温下孵育2分钟。全速 (13,000 ×g)离心2分钟。

12.Transfer cleared supernatant to a new2 ml tube.Note :if supernatant still have dark color from soil ,perform the HTR treatment again by repeat step 10-12.
转移清澈的上清液到一个新的2ml管。注意:假如上清液呈黑色,重复10-12步。

13. Add  equal volume of XP2 Buffer ,mix by vortexing. For examper: if the sample from step 12 is 250 ul, add 250 ul Buffer XP2.
加入等量的XP2 缓冲液,搅动混匀。如:12步后的量是250ul,就加入250ulXP2缓冲液。
14.Apply the sample from step 13 to a HiBind DNA Column assembled in a 2 ml collection tube(supplied).centrifuge at 10,000×g for 1 minute at room temperature. Discard flow-through liquid and re-use collection tube.
13步的样加到组装于2ml收集管(已提供)的HiBind DNA Column室温下10,000×离心1分钟,倒掉直流液体,再次使用收集管。
15.Place the column into the same 2 ml collection tube from previous step and add 300 ul XP2 Buffer. Centrifuge at 10,000×g for 1 minute. Discard the flow-through and collection tube.将柱子放到相同的先前的2ml收集管,然后加入3000ulXP2缓冲液。10,000×g离心1分钟。弃掉液体和收集管。
16.Place column into a new 2 ml collection tube(supplied) and wash by adding 700 ul SPW Wash Buffer diluted with absolute ethanol. Centrifuge at 10,000×g for 1 minute.Discard flow-through liquid and re-use collection tube in next step.Note:SPW Wash Buffer is provided as a concentrate and must bediluted with absolute ethanol as indicated on the bottle and page 4.  
将柱子置于一个新的2ml收集管(已提供),加入700ul 用无水乙醇稀释的SPW洗脱液洗脱。10,000×g离心1分钟。弃掉直流液,收集管下一步再次使用。注意:SPW洗脱液必须浓缩,必须用无水乙醇再次稀释,此项注明在瓶子上和第4页。
17.Repeat step 16 with a second 700 ul SPW Wash Buffer.
重复16步。
18.Discard liquid and re-insert the column to the empty collection tube,centrifuge the column at full speed(13,000 ×g) for 2 minutes at room temperature. This step is critical in removing traces of ethanol that will interfere with downstream applications.
弃掉液体,重新插入柱子到空的收集管,室温下全速离心2分钟。这步对清除乙醇痕迹很重要。因为乙醇会干扰下面步骤的应用。
19.Place column into a clean 1.5 ml microcentrifuge tube (not supplied). Add 30- 100 ul Elution Buffer directly onto the centre of HiBind matrix. Incubate at 65 ℃ for 10-15 minutes.
将柱子置于一个干净的1.5ml的微离心机管(没有提供)。直接加入30-100ul洗脱液在HiBind matrix的中心。65 ℃下孵育10-15分钟。
20.Centrifuge at full speed (13,000 ×g) for 1 min to Elute DNA.
全速离心1分钟,洗提DNA
21.Repeat elution step 19-20 with a second 30-100 ul Elution Buffer.
重复洗脱步骤19-20

 

 

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