不出意外，我的细胞又污染了。呃，确切地说，已经是我第四次污染细胞了（总共五次），这是第六次细胞培养。希望这次能顺利长好细胞！

实际上大概问题出在下面几点：

1）穿戴一时爽，细胞白培养

进细胞房不换鞋，不戴口罩，不戴手套，虽然感觉挺爽呼吸畅快，但其实是细胞房的大忌讳！有更严格的细胞房连帽子都要戴上。为什么呢？换鞋就不说了，你应该也知道有真菌吧。但你根本不能保证你口腔支原体是不是会污染细胞，每当你哈一口气给细胞送温暖的时候，细胞就……呵呵了。不戴手套，根本就清除不掉你手上的细菌真菌，要不你试试看拿火燎一下你的手，焦了才算灭菌。

2）紫外和酒精，乱用也不灵

 紫外和酒精能灭菌……吗？没错，能灭菌，但是紫外和酒精最多只能灭细菌，对真菌伤害很小。你不戴手套，可劲用喷壶喷手是没有什么卵用的。超净台为什么尽量要用酒精棉球而不是用酒精喷壶呢？因为用酒精棉球的话，可以在灭菌的同时把菌体从手上撸下去。而喷壶只能短暂灭菌而已，所以要多用棉球，少用喷壶。

3）生物安全柜，别超三八线 

 生物安全柜的玻璃窗是有警戒线的，超过这个警戒线，生物安全柜的风帘就起不到太大作用，而且会引入室内空气中的真菌，比如你的臭鞋里的酵母啥的。还会让你给细胞送温暖的呼吸里，自动带上支原体。

4）拿瓶不拿盖，拿盖污染快

 用细胞培养瓶来培养的时候，最最忌讳的是啥？是你拿瓶子的时候，手拿着有盖子的那一面？为啥，因为一般来说瓶盖开关是最容易接触到瓶口的，你手拿着培养瓶，那手的虎口夹缝里所含有的真菌很容易就接触到瓶盖上，一旦造成污染，就是很严重的。

5）门前堆得多，霉菌找到窝 

 生物安全柜里操作的时候，门前最忌讳堆一堆杂七杂八的东西，你看看你，枪头盒、血清、管子，培养皿、移液器、酒精喷壶、酒精灯，堆了一大堆。有的都堵住了你门前的出风口。一来你操作起来并不是井井有条，会导致动作幅度过大，扰乱气流。二来这些东西一旦挡住风口，也会扰乱生物安全柜的气流，气流变化会导致外部不洁净的空气流入，也同样会导致生物安全柜的洁净作用失效。这必须要注意！

6）清洁水浴锅，否则杂菌多

 水浴锅是比较容易忽视的，你说你复苏细胞的时候，37℃，对细菌真菌来说这就是温床啊。复苏完，湿漉漉的冻存管，任你再怎么喷酒精也并没有什么意义了。那要怎么办，水浴锅一来是定期清洁，二来是加一些抑菌剂。别别别，不是让你往里面加双抗！水浴锅里要加2%的硫酸铜，但这个是比较容易腐蚀水浴锅的，所以定期也要更换清洁。

7）水盘要污染，一箱全玩完

 刚才说了水浴锅了，那接下去讲讲另一个坐拥37℃温床的水环境，也就是培养箱的水盘。有几次我都看到水盘里飘着特别大的一块块霉斑。这孢子，是你不敢想象的。一污染就一箱子全报废了，培养箱要定期用0.1%的新洁尔灭或者84清洗（交替使用，防止微生物耐药）。水盘也一样，水盘中加入饱和的磷酸氢二钠可以有效预防细菌真菌，但是需要定期加入去离子水防止析出。

8）灭菌灭不好，污染随时找

细胞房所使用的枪头，必须要经过湿热灭菌，但你看你，湿热灭菌的枪头都没用报纸包好，不包好也就算了，灭完菌还不烤干！用报纸包裹好枪头，是因为灭菌锅一般在细胞房外面，所以要保证内部枪头盒结晶。烤干是为了防止内部有水分，当你开启枪头盒后，有水的地方更容易被霉菌的孢子所接触附着，也就更容易污染。所以这个也必须要注意！

9）激情移液器，污染洒满地

你用移液器的时候，吸液这么猛力果断，必然会把培养基或者细胞沾到移液器的口上。培养基这种东西，就是微生物的温床啊。不弄干净，下次再这么激情地用移液器，必然要污染，这个必须每次使用后，用75%的乙醇，或者5%的硫酸铜，或者0.1%的新洁尔灭来擦一下的。这样可以防止一些污染。

好了，说了这么多，这些就是你在操作的过程中，时刻需要注意的事情，养细胞不难，也不易。要不污染，就全要靠你时时刻刻把“无菌操作”这四个字记在脑海里。好了，今天就策这么多了，祝你们心明眼亮。

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