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MSC Xeno-Free SFM间充质干细胞无血清培养常见问题

作者:admin 来源:本站 发布时间: 2020-03-03 21:18  浏览次数:
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 1.Corning MSC Xeno-Free SFM 的特点是什么?

Corning MSC Xeno-Free SFM  是一种化学成分限定的无任何动物源性蛋白的培养基,可支持不同来源(脂肪,骨髓,脐带等)的人间充质干细胞培养和扩增,并可以保持干细胞的分化能力,不需要对培养容器进行预包被即可在普通培养瓶中支持间充质干细胞的长期培养,且可以维持其分化能力。
 
2.使用前培养瓶需要包被吗?
不需要,培养基中添加的促进细胞贴壁组分,可以促使细胞在普通组织处理表面(TCT)良好贴壁, 同时推荐使用Corning 独有的CellBIND 培养表面(T-25 flask, Corning # 3289), 可使间充质干细胞贴壁更好, 产量更高。
 
3.培养基使用是否要需要加入添加剂或抗生素?
该培养基为即用型完全培养基,不需要添加任何额外试剂。在细胞培养过程中可以添加抗生素来防止细菌污染,但是细胞治疗应用,添加抗生素会有致敏的风险。
 
4.培养基的运输和存储条件是什么?
培养基中添加了各种生长因子,所以在存储和运输过程中需要冷冻(<-20℃)保存, 培养基在使用前于4℃或室温融化,融化后建议4℃保存并于3-4周内用完;每次使用前室温平衡30min再使用;尽量避免培养基反复冻融,如用量不大,可将培养基分装存储于-20℃,可反复冻融1次使用。
 
5.建议细胞的接种密度是多少?
建议细胞的接种密度为5000 cells/cm²,如果是新复苏细胞或第一次使用该培养基培养,建议细胞接种密度为10000 cells/cm².
 
6.是否可以用来做间充质干细胞的原代分离培养?
否,该培养基是专为间充质干细胞的扩增培养所设计,可支持不同来源间充质干细胞的长期培养, 不能用于原代MSC 分离。
 
7.MSC 培养过程中如何传代?
根据细胞接种密度和生长状态,当细胞的融合度达到80%左右时,可进行细胞传代,弃去培养基, 适量PBS(0.2ml/cm2)润洗后弃去,加入适量商业化的胰酶替代物(Corning #  25-058-CL)消化, 显微镜下观察细胞变圆,轻轻摇晃培养瓶并吹打,使所有细胞解离表面,加适量PBS 稀释胰酶替代物,离心1000rpm,5min 收获细胞。(如果使用胰酶消化, 需要离心尽量去除胰酶,减少残留)。
 
8.为什么细胞融合度不可超过90%?
细胞生长过密,会出现接触抑制,继而细胞活性会受到影响,导致后续传代细胞生长缓慢或扩增倍数较低;并且产生接触抑制后MSC 细胞容易分化。
 
9.为什么Corning CellBIND 表面会提高间充质干细胞的收获量
Corning CellBIND 表面利用独有的表面处理技术,增加了细胞培养表面亲水的持久性与细胞吸附的稳定性,可以更好的支持贴壁细胞的培养,特别针对MSC 细胞,与Corning Xeno-Free SFM  联合使用,可有效提高细胞的收获量30%。
 
10.为什么不同来源的间充质干细胞培养时会有差异?
间充质干细胞属于原代细胞,会受到供体差异,组织来源差异及传代次数的影响,细胞在培养过程中会出现较大的差异。 Corning® MSC Xeno-Free SFM可支持脂肪、脐带和骨髓来源的间充质干细胞生长,细胞形态与间充质干细胞表面标志物表达正常,并且扩增倍数和稳定性整体表现良好。
 
11.该培养基是否可以培养其他动物来源的间充质干细胞?
该培养基专为人间充质干细胞培养扩增设计,目前不能应用于除人外其他动物来源的间充质干细。
 
12.该培养基为没有酚红作为指示剂,其换液频率是什么?
间充质干细胞培养过程中的换液频率取决于细胞培养状态和细胞接种密度,一般为3-4天进行换液,按照我们培养经验,接种密度为5000 cells/cm2, 可培养4天换液或传代,接种密度为10000 cells/cm2, 可培养3天换液或传代。
 
 
 
 
Corning® MSC Xeno-Free SFM 间充质干细胞无血清培养基
 

 

 

  Corning® MSC Xeno-Free SFM特点

成分明确,不包含血清及其他任何人源以外成分

使用方便,无需额外添加物

运输及存储温度单一(-20℃)

无需包被,直接培养

可支持不同来源间充质干细胞生长,包括:

  脂肪来源间充质干细胞 ADSC

  脐带来源间充质干细胞  UC-MSC

  骨髓来源间充质干细胞BM-MSC

 

 

 

产品订购信息

货号               产品名称                                  体积                   包装

 

88-600-CV     Corning 间充质干细胞无血清培养基                           500 毫升                  

 

 

使用Corning® MSC Xeno-Free SFM培养基进行MSC的扩增

Corning® MSC Xeno-Free SFM置于4℃冰箱至完全融化。

注意:不要将Corning® MSC Xeno-Free SFM反复冻融。为了不影响使用效果,4解冻后,建议在一个月内使用完。

 

将冻存复苏或原代分离的间充质干细胞利用Corning® MSC Xeno-Free SFM培养基直接接种于细胞培养瓶中(TCT 或者 CellBIND表面处理均可)。

 

待细胞生长铺满(融合度约80-90%),移除培养基。PBS清洗,用0.25%胰蛋白酶消化3-5min培养基终止,300g  x  5  min离心获得细胞沉淀。新培养基重悬细胞沉淀,5000-10000/cm2接种于新的培养器皿中。培养基用量依据细胞培养器皿底面积,下表可供参考。

注意:细胞接种密度可依据实验计划、不同细胞类型及供体调整。

 

Vessel

Surface Area (cm2)

Medium volume (mL)

T25 flask

25

5

T75 flask

75

15

T175 flask

175

35-50

CellSTACK

636 (1 chamber)

150

HYPERflask

1720

570

待细胞长满后,细胞可收获用于下游实验或冻存。

 


康宁相关产品

 

货号

产品名称

Qty/Pk

Qty/Cs

21-040-CV

PBS缓冲液

6

1

25-051-CI

0.05% Trypsin

6

6

430639

组织培养表面处理T-25 flask

20

200

3289

CellBIND®表面处理 T-25 flask

20

200

10024

HYPERflask

4

24

3313

CellSTACK 5-chamber, TCT

1

8

3311

CellSTACK 5-chamber, CellBIND

1

2

 

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