| Crispr基因敲除细胞系构建主要实验项目服务 |
| 序号 |
服务项目 |
具体描述 |
单价(元) |
实验周期 |
备注 |
| 2 |
Crispr引物设计 |
每个基因设计2-3对引物 |
300 |
4天 |
包含引物设计、合成费用 |
| 3 |
gRNA质粒构建 |
一对引物退火，用T4连接酶将其连接到gRNA载体中 |
900 |
1周 |
包含载体酶切、引物退火、T4连接、转化涂板 |
| 4 |
gRNA质粒提取 |
从菌液中提取gRNA质粒，测序 |
1200 |
3天 |
包含菌液接种、质粒提取，测序验证，无内毒素质粒提取 |
| 5 |
细胞培养 |
目的细胞的培养，以备细胞转染等操作 |
400 |
1周 |
包含细胞培养、传代及冻存 |
| 6 |
慢病毒包装与感染 |
在HEK293T细胞中将构建好的cas9-gRNA表达质粒包装成慢病毒后感染目的细胞 |
3000 |
2周 |
包含慢病毒包装效率的优化 |
| 7 |
抗性筛选 |
利用抗性筛选转染阳性的细胞 |
3800 |
1-2周 |
包含抗性使用浓度和时间的优化 |
| 8 |
测序检测敲除效率 |
细胞基因组提取，PCR出靶序列，测序检测 |
1300 |
1周 |
包含基因组提取，目的基因PCR和测序 |
| 9 |
分单克隆细胞 |
将抗性筛选后得到的细胞利用有限稀释法分到96孔板中，获得单克隆细胞 |
1400 |
2天 |
包含细胞消化、细胞计数、96孔板分单克隆 |
| 10 |
单克隆细胞培养传代 |
培养96孔板中的细胞，挑选由单个细胞长成的细胞群落传代扩增 |
5000 |
3-5周 |
包含单克隆细胞挑选、细胞传代扩增 |
| 11 |
基因敲除细胞株鉴定 |
WB检测单克隆细胞中目的基因的剩余表达量 |
1600 |
1-2周 |
包含20个单克隆细胞株样品制备，WB检测目的基因和内参 |
| 12 |
基因敲除细胞系冻存 |
扩增并冻存基因敲除细胞系 |
1000 |
1周 |
包含细胞扩增及冻存 |
总计（元）
|
|
19900 |
6-8周 |
/ |
| 说明：Crispr敲除实验有一定的风险，我们会先做项目分析，比较有把握才会开展后续实验，一般会选取2-3个靶点来做，抗性筛选完后确定效率最高的来筛选单克隆细胞株 |
北京毕特博生物技术有限责任公司
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