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Crispr基因敲除细胞系构建主要实验项目服务

作者:admin 来源:本站 发布时间: 2017-10-31 21:34  浏览次数:
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Crispr基因敲除细胞系构建主要实验项目服务
序号 服务项目 具体描述 单价(元) 实验周期 备注
2 Crispr引物设计 每个基因设计2-3对引物 300 4天 包含引物设计、合成费用
3 gRNA质粒构建 一对引物退火,用T4连接酶将其连接到gRNA载体中 900 1周 包含载体酶切、引物退火、T4连接、转化涂板
4 gRNA质粒提取 从菌液中提取gRNA质粒,测序 1200 3天 包含菌液接种、质粒提取,测序验证,无内毒素质粒提取
5 细胞培养 目的细胞的培养,以备细胞转染等操作 400 1周 包含细胞培养、传代及冻存
6 慢病毒包装与感染 在HEK293T细胞中将构建好的cas9-gRNA表达质粒包装成慢病毒后感染目的细胞 3000 2周 包含慢病毒包装效率的优化
7 抗性筛选 利用抗性筛选转染阳性的细胞 3800 1-2周 包含抗性使用浓度和时间的优化
8 测序检测敲除效率 细胞基因组提取,PCR出靶序列,测序检测 1300 1周 包含基因组提取,目的基因PCR和测序
9 分单克隆细胞 将抗性筛选后得到的细胞利用有限稀释法分到96孔板中,获得单克隆细胞 1400 2天 包含细胞消化、细胞计数、96孔板分单克隆
10 单克隆细胞培养传代 培养96孔板中的细胞,挑选由单个细胞长成的细胞群落传代扩增 5000 3-5周 包含单克隆细胞挑选、细胞传代扩增
11 基因敲除细胞株鉴定 WB检测单克隆细胞中目的基因的剩余表达量 1600 1-2周 包含20个单克隆细胞株样品制备,WB检测目的基因和内参
12 基因敲除细胞系冻存 扩增并冻存基因敲除细胞系 1000 1周 包含细胞扩增及冻存
总计(元)
  19900 6-8周 /
说明:Crispr敲除实验有一定的风险,我们会先做项目分析,比较有把握才会开展后续实验,一般会选取2-3个靶点来做,抗性筛选完后确定效率最高的来筛选单克隆细胞株

 

 

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