产品概述
2×SYBR Green PCR Master Mix 是采用 SYBR Green I 嵌合荧光法进行 Real Time PCR 的专用试剂。含有常温下完全封闭Taq 酶活性的热启动酶 HS Taq DNA Polymerase,能够有效抑制低温条件下引物非特异性退火或者引物二聚体引起的非特异性扩增，提高扩增反应的特异性。本试剂经过特殊配制，采用优化配方的 qPCR 专用 Buffer，大大提高了 qPCR 反应的扩增效率和检测灵敏度，可以在较宽的定量区域内得到良好的标准曲线，准确进行定量。本试剂与多数厂家的荧光定量 PCR 仪兼容，如Applied Biosystems、Eppendorf、Bio-Rad 和Roche 等。
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产品组成
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BTB1001S
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BTB1001
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2×SYBR Green PCR Master Mix
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1ml
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5×1ml
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ROX Reference Dye I(50×)
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40μL
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200μL
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ROX Reference Dye II(50×)
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40μL
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200μL
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储存条件：
本产品-20℃保存有效期至少一年，4℃可保存3个月。解冻后应充分混匀，避免产生大量气泡。
qPCR反应体系配制：
建议的模板量 10～100ng（基因组 DNA）或 1～10ng（cDNA 模板）。
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试剂
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20μl 体系
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50μl 体系
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终浓度
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2×SYBR Green PCR Master Mix
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10μl
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25μl
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1×
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Primer 1（10μM）
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0.4～2μl
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1～5μl
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0.2～1.0μM
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Primer 2（10μM）
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0.4～2μl
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1～5μl
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0.2～1.0μM
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Template DNA
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4μl
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10μl
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ddH2O
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Total volume
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20μl
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50μl
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适用机型：
以下机型无需使用ROX Reference Dye校正：
Roche LightCycler 480，Roche Light Cycler 96，MJ Research Chromo4，MJ Research Opticon 2，Takara TP-800, Bio-Rad iCycler iQ,Bio-Rad iCycler iQ5,Bio-Rad CFX96,Bio-Rad C1000 Thermal Cycler,Thermo Scientific Pikoreal 96, Qiagen Corbett Rotor-Gene 6000,Qiagen Corbett Rotor-Gene G,Qiagen Corbett Rotor-Gene Q,Qiagen Corbett Rotor Gene 3000，Mastercycler ep realplex。
以下机型进行ROX Reference Dye校正模式，需额外添加校正染料:
➢使用ROX Reference DyeI (50x) 的PCR仪(使用时终浓度为1x)
ABI Prism 7000/7300/7700/7900，ABI Step One, ABI Step One Plus，ABI 7900HT，ABI 7900HT Fast StepOnePlus Real-Time PCR System。
➢使用ROX Reference DyelI (50x) 的PCR仪(使用时终浓度为1x)
ABI Prism 7500，ABI Prism 7500 Fast, ABI QuantStudio DX/3/5, ABI QuantStudio 6/7/12K Flex, ABI ViA 7, Stratagene Mx3000P/Mx 3005P/Mx 4000
标准GMP生产车间
SYBR Green PCR Master Mix 生产和测试
质量评估指标：
1、Cq值相比主流品牌差异；
2、NTC有无非特异性扩增；
3、扩增效率相比主流品牌差异；
4、模板在低拷贝极限下，特异性扩增相比主流品牌差异；
5、平台期的荧光值相比主流品牌差异；
6、批次之间扩增曲线、溶解曲线重复性情况；
7、模拟运输环境测试，产品性能重复性情况。
进行人源β-actin扩增
以人源的CDNA原液进行8倍梯度稀释，稀释9个点进行扩增。
模拟4℃冰袋运输4天的性能测试
测试结果描述
1、Cq值比主流品牌更优；
2、NTC无非特异性扩增；
3、扩增效率比主流品牌更优；
4、模板在低拷贝极限下，特异性扩增和主流品牌一致；
5、平台期的荧光值比主流品牌更优；
6、批次之间扩增曲线、溶解曲线表现稳定；
7、模拟运输环境测试，产品性能表现稳定。
北京毕特博生物技术有限公司
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